22.苯丙酮尿癥是單基因遺傳病,科學(xué)家將正常基因D導(dǎo)入該病患者的細(xì)胞,以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒,圖乙為含有目的基因D的DNA片段,圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨節(jié)青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍(lán)色顯色基因,其表達(dá)產(chǎn)物可以將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì),使菌落呈藍(lán)色,EcoRI(0.7Kb)、PvuI(0.8Kb)為限制酶及其切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)之間的距離?;卮鹣铝袉栴}:
(1)基因工程操作的核心步驟是
。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運(yùn)載體的是質(zhì)粒
,與另外兩種質(zhì)粒相比,其作為載體的優(yōu)點(diǎn)是
。
(2)獲取目的基因D時(shí)應(yīng)選擇乙圖中的
對(duì)其所在的DNA進(jìn)行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列,根據(jù)D基因已知核苷酸序列合成
,利用PCR擴(kuò)增目的基因。
(3)將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后,得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒,使用
對(duì)質(zhì)粒完全酶切后,進(jìn)行電泳分析。若是正向連接載體,電泳圖譜中出現(xiàn)長(zhǎng)度為
Kb和
Kb兩條帶。
(4)利用自身不含lacZ基因且對(duì)抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞的方法是
。