1．種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥（2n=10）進(jìn)行誘變篩選到一株種子增大的突變體。通過遺傳分析和測序，發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個堿基G到A的替換，突變后的基因為隱性基因，據(jù)此推測突變體的表型與其有關(guān)，開展相關(guān)實驗?；卮鹣铝袉栴}：
（1）擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，用PCR反應(yīng)擴增DAI基因，用限制性內(nèi)切核酸酶對PCR產(chǎn)物和 進(jìn)行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備 。
（2）轉(zhuǎn)化后，T-DNA（其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換）可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單端一位點插入的植株，并進(jìn)一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株（如圖），用于后續(xù)驗證突變基因與表型的關(guān)系。

①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T₀代植株并自交，將T₁代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基因組中插入了 。
②T₁代陽性植株自交所得的T₂代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽性率約 %的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。
③將②中選出的T₂代陽性植株 （填“自交”、“與野生型雜交”或“與突變體雜交”）所得的T₃代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽性率達(dá)到 %的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。

2．RNA沉默是雙鏈RNA被特異性的核酸酶降解，產(chǎn)生小干擾RNA（siRNA），這些siRNA與同源的靶RNA互補結(jié)合，特異降解靶RNA，從而抑制基因表達(dá)。棉蚜是棉花的主要害蟲，嚴(yán)重危害棉花的生產(chǎn)。E基因是棉蚜生長發(fā)育的重要基因，為了控制棉蚜對棉花的危害，科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，在棉花中表達(dá)棉蚜E基因的雙鏈RNA（dsRNA），特異性抑制棉蚜內(nèi)源E基因的表達(dá)。如圖是主要流程，請回答：

限制酶	識別序列和切點
EcoRⅠ	G↓AATTC
KpnⅠ	G↓GTACC
BamHⅠ	G↓GATCC
XbaⅠ	T↓CTAGA

（1）根據(jù)PCR1反應(yīng)體系中加入的引物1和2推測PCR2中加入的引物為 。
A．5'-AAATCTAGAAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
B．5'-AAATCTAGACTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
C．5'-AAAGGATCCAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
D．5'-AAAGGATCCCTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
（2）從理論上推測，PCR1第五輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物1的DNA片段所占的比例為 。圖中正義序列和反義序列中堿基排列順序 （填“大多數(shù)相同”或“大多數(shù)不同”或“相同”或“不同”）。過程①需要的工具酶除限制酶外還需要 。
（3）過程②將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到經(jīng) 處理的農(nóng)桿菌菌株后，為了確定重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化可以通過 驗證。
（4）過程④愈傷組織形成棉花植株的過程稱為 。轉(zhuǎn)基因棉花再生植株移栽到溫室后，葉片涂抹 檢測抗性，并提取DNA進(jìn)行PCR分析。
（5）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉(zhuǎn)化的4株棉花植株葉片的基因組DNA，用HindⅢ完全消化，消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結(jié)果如圖2所示（圖中數(shù)字2～5代表轉(zhuǎn)化成功的植株，數(shù)字1代表對照組）。下列有關(guān)分析正確的有 。
①對照組可以用非轉(zhuǎn)基因棉花的基因組DNA進(jìn)行實驗
②數(shù)字3所代表的植株中目的基因插入染色中的兩個不同位置
③選擇HindⅢ進(jìn)行消化的原因是基因組DNA中一般只有1～2切點
④相同位置上雜交帶對應(yīng)DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
（6）科研人員進(jìn)一步鑒定上述4號泳道對應(yīng)的植株，確定獲得一株轉(zhuǎn)基因抗性植株CZ4，CZ4連續(xù)自交兩代，則F₂中抗性植株占比為 。

3．某研究小組利用水稻細(xì)胞培育能產(chǎn)生HPV（人乳頭瘤病毒）-L1蛋白的水稻胚乳細(xì)胞生物反應(yīng)器，為獲得HPV-L1蛋白提供一種新的高效、低廉的途徑，用于制備HPV疫苗。其基本流程包括表達(dá)載體的構(gòu)建、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、水稻細(xì)胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)基因植株的篩選等步驟，最終獲得能產(chǎn)生含HPV-L1蛋白胚乳細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因水稻?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR是獲取HPV-L1基因的一種方法，PCR反應(yīng)體系設(shè)計的兩種引物，在引物間和引物內(nèi)的堿基都不能互補，其原因是 。
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化：科研人員構(gòu)建了如圖所示的表達(dá)載體，將其與經(jīng)過Ca²⁺處理后的農(nóng)桿菌細(xì)胞混合，隨后將菌液涂布在含 的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定后再擴大培養(yǎng)待用。
（3）水稻細(xì)胞轉(zhuǎn)化：取水稻離體組織置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基啟動子潮霉素啟動子抗性基因中發(fā)生 過程形成愈傷組織。挑取生長良好的愈傷組織加入到（2）中得到的菌液中共培養(yǎng)，完成轉(zhuǎn)化過程。
（4）轉(zhuǎn)基因水稻的篩選：將轉(zhuǎn)化處理后的水稻愈傷組織放在含 （抗生素）的培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)，并誘導(dǎo)出轉(zhuǎn)基因水稻。
（5）水稻胚乳生物反應(yīng)器具有提取和處理產(chǎn)物簡易、生產(chǎn)成本低和生物安全性高等特點，從而被廣泛應(yīng)用。請在分子水平上提出兩個提高水稻胚乳生物反應(yīng)器產(chǎn)物產(chǎn)量的思路：。