抗菌肽通常是由幾十個氨基酸構(gòu)成的小分子肽,具有廣譜的殺菌活性,對病毒和癌細(xì)胞都有一定的殺傷能力,除此之外還具有一定的免疫學(xué)活力。目前基因工程菌的異源表達(dá)系統(tǒng)在生產(chǎn)不同大小、折疊和復(fù)雜性的異源抗菌肽方面取得了很大的進(jìn)步。圖為基因工程菌生產(chǎn)抗菌肽的示意圖,圖中①表示過程,②表示結(jié)構(gòu)。回答下列問題:
(1)圖中過程①為
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
,該過程所用的DNA連接根據(jù)來源不同可分為E.coliDNA連接酶
E.coliDNA連接酶
和T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
,結(jié)構(gòu)②是重組質(zhì)?;蚧虮磉_(dá)載體
重組質(zhì)?;蚧虮磉_(dá)載體
。
(2)生產(chǎn)抗菌肽的主要表達(dá)系統(tǒng)是細(xì)菌和酵母表達(dá)系統(tǒng)。作為表達(dá)系統(tǒng),他們的組成基本相同,都是由基因表達(dá)載體及受體細(xì)胞組成的,基因表達(dá)載體中的啟動子
啟動子
是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。
(3)若圖中受體細(xì)胞是大腸桿菌,將②導(dǎo)入時,首先要用Ca2+處理,使細(xì)胞處于一種容易吸收周圍環(huán)境DNA分子的生理狀態(tài)(或處于感受態(tài))
處于一種容易吸收周圍環(huán)境DNA分子的生理狀態(tài)(或處于感受態(tài))
;與真核生物不同,大腸桿菌表達(dá)的系統(tǒng)不具有后期的修飾蛋白(或?qū)Χ嚯倪M(jìn)行修飾加工)
后期的修飾蛋白(或?qū)Χ嚯倪M(jìn)行修飾加工)
能力,使得分泌的抗菌肽的穩(wěn)定性和活性較弱。
(4)若要檢測目的基因是否表達(dá)出AMPs抗菌肽,常用的分子檢測方法為抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
。