我國(guó)科技工作者發(fā)明的維生素C“二步發(fā)酵法”生產(chǎn)工藝是世界首創(chuàng)。第一步發(fā)酵用醋酸桿菌為菌種，第二步發(fā)酵用氧化葡萄糖酸桿菌（“小菌”）和假單胞桿菌（“大菌”）混合菌種。如圖為二步發(fā)酵法的生產(chǎn)流程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）為純化和保存菌種，取適量一步發(fā)酵液稀釋后用

涂布

涂布

法接種在含有碳酸鈣粉的培養(yǎng)基上，以

C

C

（填下列選項(xiàng)代號(hào)）為最佳指標(biāo)，分離保存菌種。
A．菌落直徑大小
B．溶鈣圈大小
C．溶鈣圈直徑與菌落直徑比值
（2）對(duì)一步發(fā)酵培養(yǎng)液檢測(cè)發(fā)現(xiàn)幾乎沒(méi)有雜菌存在，推測(cè)可能的原因是

培養(yǎng)液呈酸性抑制雜菌的生長(zhǎng)

培養(yǎng)液呈酸性抑制雜菌的生長(zhǎng)

。
（3）二步發(fā)酵過(guò)程中大小菌的菌種數(shù)比例會(huì)影響產(chǎn)酸率，種液接入發(fā)酵罐前需對(duì)種液中的大小菌計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)所用的培養(yǎng)基除含有與發(fā)酵液相同的成分外，還需添加

瓊脂

瓊脂

。在培養(yǎng)基上，可根據(jù)菌落的

大小、顏色、形狀或隆起程度

大小、顏色、形狀或隆起程度

等特征（至少寫(xiě)兩個(gè)）對(duì)大小菌分別計(jì)數(shù)。
（4）某檢測(cè)員將種液稀釋接種了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)假單胞桿菌的菌落數(shù)分別是30、100和200，取平均值110。該結(jié)果可信度低，原因是

數(shù)據(jù)差距太大，重復(fù)性差

數(shù)據(jù)差距太大，重復(fù)性差

。
（5）若要嘗試固定化混合菌進(jìn)行二步發(fā)酵生產(chǎn)古龍酸，應(yīng)選擇

包埋

包埋

法進(jìn)行固定。結(jié)合題意，你認(rèn)為固定化混合菌操作時(shí)要注意哪些方面？

大小菌的混合比例、避免包埋方法對(duì)菌種活性影響、避免包埋時(shí)混入雜菌等

大小菌的混合比例、避免包埋方法對(duì)菌種活性影響、避免包埋時(shí)混入雜菌等

（答出一點(diǎn)即可）。