奶酪是一種被廣泛食用的發(fā)酵奶制品。大多數(shù)奶酪的生產(chǎn)需要使用凝乳酶來(lái)凝聚固化奶中的蛋白質(zhì)?？茖W(xué)家將編碼牛凝乳酶的基因?qū)氪竽c桿菌的基因組中，再通過(guò)工業(yè)發(fā)酵批量生產(chǎn)凝乳酶。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）科學(xué)家們常用PCR技術(shù)擴(kuò)增牛凝乳酶基因，該反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中進(jìn)行，還需要提供DNA模板、2種引物、dATP、dTTP、dCTP、dGTP和

耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

等物質(zhì)。
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，科學(xué)家們常選擇雙酶切（同時(shí)用兩種限制酶切割含目的基因的DNA和質(zhì)粒），與單一酶切相比，雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是可以避免出現(xiàn)

目的基因與質(zhì)粒任意連接（或目的基因與目的基因、質(zhì)粒與質(zhì)粒發(fā)生自身連接或自身（連接）環(huán)化等）

目的基因與質(zhì)粒任意連接（或目的基因與目的基因、質(zhì)粒與質(zhì)粒發(fā)生自身連接或自身（連接）環(huán)化等）

。
（3）科學(xué)家們常用

Ca²⁺（或CaCl₂）

Ca²⁺（或CaCl₂）

處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。嘗試推測(cè)科學(xué)家們確定轉(zhuǎn)基因大腸桿菌是否產(chǎn)生牛凝乳酶的方法思路是

培養(yǎng)大腸桿菌，分離提純其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，并進(jìn)行鑒定（抗原—抗體雜交反應(yīng)）確定是否含有牛凝乳酶

培養(yǎng)大腸桿菌，分離提純其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，并進(jìn)行鑒定（抗原—抗體雜交反應(yīng)）確定是否含有牛凝乳酶

。
（4）篩選出轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌后，科學(xué)家們常將其轉(zhuǎn)入LB培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，從物理性質(zhì)上分該培養(yǎng)基屬于

液體

液體

培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基應(yīng)中含有

水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽

水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽

等四類基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
（5）為確定轉(zhuǎn)基因大腸桿菌的平均產(chǎn)酶能力，常需對(duì)轉(zhuǎn)基因大腸桿菌的活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，推測(cè)科學(xué)家最可能用到的計(jì)數(shù)方法是

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

。該計(jì)數(shù)方法也可用于微生物的分離，其分離微生物的原理是

通過(guò)（梯度）稀釋將聚集的菌種分離（分散）成單個(gè)細(xì)胞，并在培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落

通過(guò)（梯度）稀釋將聚集的菌種分離（分散）成單個(gè)細(xì)胞，并在培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落

。除上述方法外，科學(xué)家們還可以用

平板劃線法

平板劃線法

法分離獲得高產(chǎn)大腸桿菌菌株。