奶酪是一種被廣泛食用的發(fā)酵奶制品。大多數(shù)奶酪的生產(chǎn)需要使用凝乳酶來凝聚固化奶中的蛋白質?？茖W家將編碼牛凝乳酶的基因導入大腸桿菌的基因組中，再通過工業(yè)發(fā)酵批量生產(chǎn)凝乳酶。請回答下列問題：
（1）科學家們常用PCR技術擴增牛凝乳酶基因，該反應需要在一定的緩沖溶液中進行，還需要提供DNA模板、2種引物、dATP、dTTP、dCTP、dGTP和

耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

等物質。
（2）在構建基因表達載體時，科學家們常選擇雙酶切（同時用兩種限制酶切割含目的基因的DNA和質粒），與單一酶切相比，雙酶切的優(yōu)點是可以避免出現(xiàn)

目的基因與質粒任意連接（或目的基因與目的基因、質粒與質粒發(fā)生自身連接或自身（連接）環(huán)化等）

目的基因與質粒任意連接（或目的基因與目的基因、質粒與質粒發(fā)生自身連接或自身（連接）環(huán)化等）

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（3）科學家們常用

Ca²⁺（或CaCl₂）

Ca²⁺（或CaCl₂）

處理大腸桿菌細胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達載體導入其中。嘗試推測科學家們確定轉基因大腸桿菌是否產(chǎn)生牛凝乳酶的方法思路是

培養(yǎng)大腸桿菌，分離提純其產(chǎn)生的蛋白質，并進行鑒定（抗原—抗體雜交反應）確定是否含有牛凝乳酶

培養(yǎng)大腸桿菌，分離提純其產(chǎn)生的蛋白質，并進行鑒定（抗原—抗體雜交反應）確定是否含有牛凝乳酶

。
（4）篩選出轉化成功的大腸桿菌后，科學家們常將其轉入LB培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，從物理性質上分該培養(yǎng)基屬于

液體

液體

培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基應中含有

水、碳源、氮源、無機鹽

水、碳源、氮源、無機鹽

等四類基本營養(yǎng)物質。
（5）為確定轉基因大腸桿菌的平均產(chǎn)酶能力，常需對轉基因大腸桿菌的活菌進行計數(shù)，推測科學家最可能用到的計數(shù)方法是

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

。該計數(shù)方法也可用于微生物的分離，其分離微生物的原理是

通過（梯度）稀釋將聚集的菌種分離（分散）成單個細胞，并在培養(yǎng)基上形成單個菌落

通過（梯度）稀釋將聚集的菌種分離（分散）成單個細胞，并在培養(yǎng)基上形成單個菌落

。除上述方法外，科學家們還可以用

平板劃線法

平板劃線法

法分離獲得高產(chǎn)大腸桿菌菌株。