20.黃曲霉素是黃曲霉菌等霉菌產(chǎn)生的對(duì)人和動(dòng)物具有劇毒、強(qiáng)致癌的一類代謝產(chǎn)物,包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1等幾種。其中AFB1是對(duì)玉米和花生造成污染最嚴(yán)重的黃曲霉素。通過制備單克隆抗體可明顯提高對(duì)玉米等糧食中黃曲霉素檢測(cè)的靈敏度和特異性。
(1)AFB1進(jìn)入細(xì)胞后能與tRNA結(jié)合形成復(fù)合物,抑制tRNA與某些氨基酸結(jié)合,從而干擾基因表達(dá)的
過程。AFB1能特異性誘發(fā)人肝細(xì)胞中抑癌基因p53發(fā)生堿基對(duì)替換,從而使該基因發(fā)生
,誘發(fā)肝癌。
(2)以下是抗AFB1的單克隆抗體的簡(jiǎn)要制備思路。
①AFB1屬于小分子物質(zhì),不具有刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的免疫原性,制備時(shí)需要將AFB1與某些物質(zhì)結(jié)合成具有免疫原性的完全抗原。下列物質(zhì)中不能參與合成完全抗原的是
。
a.牛血清白蛋白b.卵清蛋白 c.丙氨酸d.葡萄糖 e.香豆素
②將經(jīng)完全抗原AFB1-BSA(BSA是牛血清白蛋白)免疫的小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過融合,經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選和檢測(cè)等過程,最終選擇出
細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),從培養(yǎng)液中分離提純得到抗AFB1的抗體。
③利用抗原—抗體雜交技術(shù)對(duì)抗AFB1抗體進(jìn)行特異性和靈敏度鑒定。下表是三種抗AFBI抗體的交叉反應(yīng)鑒定結(jié)果。
被測(cè)黃曲霉素 |
AFB1 |
AFB2 |
AFG1 |
AFG2 |
AFM1 |
2A11交叉反應(yīng)率(%) |
100 |
17.1 |
0.56 |
0.37 |
未檢測(cè)到 |
3A12交叉反應(yīng)率(%) |
100 |
7.8 |
20.2 |
0.6 |
<0.1 |
3G1交叉反應(yīng)率(%) |
100 |
6.4 |
<0.1 |
<0.1 |
未檢測(cè)到 |
注:交叉反應(yīng)率表示抗體和抗原或抗原類似物的結(jié)合程度
I.上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,3種抗AFB
1抗體與除AFB
1外的其他黃曲霉素均能發(fā)生一定的反應(yīng),原因是
。
Ⅱ.根據(jù)交叉反應(yīng)結(jié)果,應(yīng)選用能產(chǎn)生
抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)以獲得大量的該抗體用于檢測(cè)。
(3)香豆素(C
9H
6O
2)是一種對(duì)人畜低毒的AFB
1結(jié)構(gòu)類似物。玉米種植土壤中存在利用胞外酶降解AFB
1的多種微生物?,F(xiàn)要對(duì)已污染的玉來樣品進(jìn)行AFB
1的微生物脫毒處理,請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)安全,有效的生物處理方案。