如圖所示為A,B、C三種質(zhì)粒和一個含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍色顯色基因,EcoRⅠ,PvuⅠ為兩種限制酶,質(zhì)粒上限制酶括號內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點與復制原點的距離?;卮鹣铝袉栴}:
(1)據(jù)圖分析質(zhì)粒A、C一般不能作為運載體的理由分別是
(質(zhì)粒A)缺少標記基因
(質(zhì)粒A)缺少標記基因
、(質(zhì)粒A)缺少標記基因、(質(zhì)粒C)復制原點會被限制酶切割
(質(zhì)粒A)缺少標記基因、(質(zhì)粒C)復制原點會被限制酶切割
。若要獲取目的基因,應該選用 PvuⅠ
PvuⅠ
酶切割。
(2)將圖中的目的基因與質(zhì)粒B進行重組。在基因工程的操作過程中,需要檢查目的基因是否重組到質(zhì)粒中,應使用 EcoRⅠ
EcoRⅠ
酶切重組質(zhì)粒,完全酶切后,進行電泳檢測。若電泳圖譜中出現(xiàn)長度為1.1kb和5.6kb,或者 3.1
3.1
kb和 3.6
3.6
kb的片段,則可判斷該重組質(zhì)粒已與目的基因重組成功(重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的堿基對忽略不計)。
(3)若選擇自身不含lacZ基因并對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞,則如何篩選成功導入重組質(zhì)粒的受體細胞?在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)過導入處理的大腸桿菌,能形成白色菌落的即為導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌
在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)過導入處理的大腸桿菌,能形成白色菌落的即為導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌
。目的基因能在大腸桿菌細胞內(nèi)表達出相同的蛋白質(zhì),其遺傳學基礎(chǔ)是 自然界的生物共用一套遺傳密碼子
自然界的生物共用一套遺傳密碼子
。