科研團隊通過培養(yǎng)基因X敲除的小鼠以確定基因X的功能?？蒲腥藛T構(gòu)建了基因X置換載體，主要過程如圖1所示（G418可殺死動物細胞），HSV-tK基因的表達產(chǎn)物能將DHPG（丙氧鳥苷）轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)而使細胞死亡；然后采用一定的方法將基因X的置換載體導入到小鼠特定細胞，在特定細胞中基因X的置換載體可以和染色體上目的基因所在區(qū)段發(fā)生同源重組，再通過篩選，即可得到打靶成功的細胞，也可以隨機插入到染色體中，主要過程如圖2所示；將符合要求的細胞進一步培養(yǎng)即可獲得基因X敲除的小鼠。
（1）研究發(fā)現(xiàn)，熱穩(wěn)定DNA聚合酶不能直接啟動DNA新鏈的合成，即不能從頭合成DNA，因此PCR反應體系中必需加入 引物引物。
（2）圖1中引物R1和F2的5′端分別添加了與引物FG和RG互補的序列。引物R1的5′端添加與引物FG互補序列的目的是 便于H1和GR拼接（便于形成 H1+GR融合基因）便于H1和GR拼接（便于形成 H1+GR融合基因）。在PCR5中加入的引物是 R2和FGR2和FG。
（3）圖2中的細胞一般是小鼠的 胚胎干細胞（或受精卵）胚胎干細胞（或受精卵），常采用 顯微注射顯微注射法將基因X置換載體導入這些細胞。
（4）將置換載體導入特定細胞后，除了發(fā)生同源重組外，還會發(fā)生非同源重組，如圖2所示。為篩選出成功實現(xiàn)預期基因敲除的細胞，對培養(yǎng)基的要求是 含有G418和 DHPG（丙氧鳥苷）含有G418和 DHPG（丙氧鳥苷），發(fā)生非同源重組獲得的細胞不能在此培養(yǎng)基上存活的原因是 發(fā)生非同源重組的細胞含有 HSV一tK基因，其表達產(chǎn)物會將 DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)而使細胞死亡發(fā)生非同源重組的細胞含有 HSV一tK基因，其表達產(chǎn)物會將 DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)而使細胞死亡。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】引物；便于H1和GR拼接（便于形成 H1+GR融合基因）；R2和FG；胚胎干細胞（或受精卵）；顯微注射；含有G418和 DHPG（丙氧鳥苷）；發(fā)生非同源重組的細胞含有 HSV一tK基因，其表達產(chǎn)物會將 DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)而使細胞死亡
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：27引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
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（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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