苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學(xué)家將正常基因D導(dǎo)入該病患者的細(xì)胞，以治療該病。圖甲為質(zhì)粒，長度為2.7kb。其中Ap為氨芐青霉素抗性基因；lacZ為藍色顯色基因，其表達產(chǎn)物可以將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍色物質(zhì)，使菌落呈藍色；EcoRⅠ（0.6Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離。圖乙為含有目的基因D的DNA片段?；卮鹣铝袉栴}：
（1）利用PCR技術(shù)獲取目的基因D時，設(shè)計引物的依據(jù)是 目的基因D兩端的堿基序列目的基因D兩端的堿基序列，引物的長度通常為 20～3020～30個核苷酸，之所以需要引物是由于 DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從3′端延伸DNA鏈DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從3′端延伸DNA鏈。在PCR反應(yīng)體系中除了引物、DNA模板之外，還有 4種脫氧核苷酸（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、耐高溫的DNA聚合酶、Mg2+、緩沖液4種脫氧核苷酸（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、耐高溫的DNA聚合酶、Mg2+、緩沖液。
（2）構(gòu)建基因表達載體時，需將目的基因D和質(zhì)粒分別用 PvuIPvuI進行切割，然后它們混合在一起，添加 DNA連接DNA連接酶，得到的產(chǎn)物有 目的基因D正向接入的重組質(zhì)粒、目的基因D反向接入的重組質(zhì)粒、沒有接入目的基因D的質(zhì)粒自身環(huán)化的產(chǎn)物、目的基因D自身環(huán)化的產(chǎn)物目的基因D正向接入的重組質(zhì)粒、目的基因D反向接入的重組質(zhì)粒、沒有接入目的基因D的質(zhì)粒自身環(huán)化的產(chǎn)物、目的基因D自身環(huán)化的產(chǎn)物。
（3）為選出符合要求的重組質(zhì)粒，使用EcoRⅠ對質(zhì)粒完全酶切后，進行電泳分析。若是符合要求的重組質(zhì)粒，電泳圖譜中出現(xiàn)條帶長度為 1.2kb和5.5kb1.2kb和5.5kb。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，要篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒，培養(yǎng)基中應(yīng)添加 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal，其中符合要求的菌落為 白色菌落白色菌落。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因D兩端的堿基序列；20～30；DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從3′端延伸DNA鏈；4種脫氧核苷酸（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、耐高溫的DNA聚合酶、Mg2+、緩沖液；PvuI；DNA連接；目的基因D正向接入的重組質(zhì)粒、目的基因D反向接入的重組質(zhì)粒、沒有接入目的基因D的質(zhì)粒自身環(huán)化的產(chǎn)物、目的基因D自身環(huán)化的產(chǎn)物；1.2kb和5.5kb；氨芐青霉素和X-gal；白色菌落
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/7 8:0:9組卷：7引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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