生物工程與微生物
基因工程賦予生物新的遺傳特性，如利用大腸桿菌實現人胰島素大規(guī)模生產。圖1為2種限制酶識別序列和切割點，圖2為目的基因與pBR322質粒形成重組質粒的2種情況，圖3為抗藥性篩選流程。（注：BamHⅠ、PstⅠ、MboⅠ為限制酶，ori為復制起點，Amp為氨芐青霉素抗性基因，Tet為四環(huán)素抗性基因。上標“r”代表抗性；“s”代表敏感）。
（1）獲取人的胰島素基因（目的基因）通常有兩種方法，現已得到人胰島素mRNA分子片段序列，可通過 逆轉錄逆轉錄過程去獲得胰島素基因。
（2）大腸桿菌pBR322質粒中含有氨芐青霉素抗性基因（Amp）和四環(huán)素抗性基因（Tet），這些可供篩選使用的功能性基因稱為 標記基因標記基因。
（3）據圖1、2中的信息，若人胰島素目的基因與質粒分別使用MboI和BamHⅠ不同的限制酶切開，插在質粒pBR322的BamHⅠ位點處，在形成重組質粒之后，如何重新“卸下”目的基因？為什么 可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因為BamHI限制酶的識別序列消失了可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因為BamHI限制酶的識別序列消失了。
（4）抗藥性篩選法實施的前提條件是載體DNA攜帶抗生素的抗性基因。如果采用圖3抗藥性篩選流程，則可篩選出的含重組質粒的大腸桿菌的表現型是 BB。
A．僅AmpsTetr
B．僅AmprTets
C．AmpsTetr和AmprTets
D．AmpsTetr或AmprTets
（5）除抗藥性篩選法外，顯色篩選也是常用的方法。很多大腸桿菌的質粒上含有l(wèi)acZ′標記基因，其表達的酶蛋白可將一種無色的化合物（X-gal）水解成藍色產物。若重組DNA技術常用的大腸桿菌質粒pUC18同時攜帶Ampr和LacZ′兩個標記基因，據圖4分析，若想篩選出重組質粒，配制的固體培養(yǎng)基上，需含有 Amp和X-galAmp和X-gal，經轉化、擴增、涂布，圖4中含重組質粒的是 白色白色（白色/藍色）菌落。
（6）抗藥性篩選法、顯色篩選同時使用與單用抗藥性篩選法兩者有何區(qū)別？你認為哪種方法更具有優(yōu)勢？為什么？
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉錄；標記基因；可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因為BamHI限制酶的識別序列消失了；B；Amp和X-gal；白色
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：52難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6