圖1為T(mén)i質(zhì)粒酶切圖譜。圖2為含Bt基因（殺蟲(chóng)毒蛋白基因）的外源DNA片段的限制酶酶切圖譜。圖3表示相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)?，F(xiàn)欲通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）除四環(huán)素抗性基因和Bt基因外，作為表達(dá)載體，該質(zhì)粒至少還應(yīng)該具有

啟動(dòng)子、終止子（或復(fù)制原點(diǎn)）

啟動(dòng)子、終止子（或復(fù)制原點(diǎn)）

等調(diào)控元件；PstⅠ等的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)應(yīng)位于

T-DNA

T-DNA

片段內(nèi)，以確保Bt基因隨Ti質(zhì)粒進(jìn)入棉花細(xì)胞后能插入到棉花細(xì)胞中的染色體DNA上。
（2）為保證Bt基因與Ti質(zhì)粒的正常連接，應(yīng)選用

PstⅠ

PstⅠ

酶和MseⅠ酶切割外源DNA，并將Ti質(zhì)粒上的序列“GAATTC”改造為

GAATTAATTC

GAATTAATTC

。
（3）轉(zhuǎn)Bt基因的棉花細(xì)胞經(jīng)過(guò)

脫分化、再分化

脫分化、再分化

過(guò)程可以培育成轉(zhuǎn)基因棉花幼苗；利用抗原—抗體反應(yīng)等原理，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉幼葉中的Bt毒蛋白及其含量，以此來(lái)檢測(cè)

Bt基因是否表達(dá)及表達(dá)程度

Bt基因是否表達(dá)及表達(dá)程度

。
（4）我國(guó)發(fā)放了6種轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)口安全證書(shū)，但進(jìn)口的基本上是轉(zhuǎn)基因棉花的纖維而不是轉(zhuǎn)基因玉米等糧食產(chǎn)品，從轉(zhuǎn)基因技術(shù)安全性的角度分析，原因是

轉(zhuǎn)基因糧食產(chǎn)品用于加工成食品，可能影響人體健康，而轉(zhuǎn)基因棉花的纖維不是用于加工成食品

轉(zhuǎn)基因糧食產(chǎn)品用于加工成食品，可能影響人體健康，而轉(zhuǎn)基因棉花的纖維不是用于加工成食品

。