結(jié)核病是由結(jié)核桿菌引起的人畜共患病。結(jié)核桿菌通常以氣溶膠形式傳播，氣溶膠顆粒被肺泡吞噬細(xì)胞吞噬，吞噬細(xì)胞破裂導(dǎo)致結(jié)核桿菌在機(jī)體內(nèi)進(jìn)一步傳播。羊癢病是由正常細(xì)胞的非致病性朊蛋白異構(gòu)化為癢病朊蛋白所致。為研制既能抗結(jié)核病又能抗羊癢病的雙抗羊，科學(xué)家進(jìn)行了如圖操作。

（1）小鼠SP110基因是目前發(fā)現(xiàn)的具有抗結(jié)核桿菌感染功能的基因。為了驗(yàn)證SP110基因的功能，同時(shí)也為了驗(yàn)證山羊吞噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子MSR可以啟動(dòng)SP110基因在吞噬細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，設(shè)計(jì)以下三組實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)組將MRS啟動(dòng)子與小鼠SP110基因形成融合基因，用

限制酶和DNA連接酶

限制酶和DNA連接酶

將融合基因與質(zhì)粒構(gòu)建成重組質(zhì)粒，導(dǎo)入山羊肺泡吞噬細(xì)胞（組2）。以

轉(zhuǎn)入廣泛表達(dá)小鼠SP110基因的重組質(zhì)粒的山羊吞噬細(xì)胞

轉(zhuǎn)入廣泛表達(dá)小鼠SP110基因的重組質(zhì)粒的山羊吞噬細(xì)胞

（組3）和轉(zhuǎn)入空質(zhì)粒的山羊吞噬細(xì)胞為對(duì)照組（組1）。分別接種等量的結(jié)核桿菌，72h后加入

蒸餾水

蒸餾水

使吞噬細(xì)胞破裂，取裂解液進(jìn)行涂布培養(yǎng)，結(jié)果如圖1。由圖可知小鼠SP110基因可用于雙抗羊的研制，依據(jù)是

組2的吞噬細(xì)胞裂解后釋放的結(jié)核桿菌數(shù)量與組3接近，顯著小于組1

組2的吞噬細(xì)胞裂解后釋放的結(jié)核桿菌數(shù)量與組3接近，顯著小于組1

。
（2）非致病性朊蛋白是由山羊13號(hào)染色體上的PRNP基因的第三外顯子控制合成的，PRNP基因的結(jié)構(gòu)如圖2。以L4和R1為識(shí)別位點(diǎn)設(shè)計(jì)TALEN敲除載體，對(duì)山羊成纖維細(xì)胞L4與R1之間的序列實(shí)施定點(diǎn)敲除。然后，將TALEN敲除載體與供體DNA載體共轉(zhuǎn)化幼羊成纖維細(xì)胞，可將SP110基因定點(diǎn)敲入PRNP基因的第三外顯子中，原理如圖3。請(qǐng)指出圖4中的數(shù)字分別代表的結(jié)構(gòu)。1

L4序列

L4序列

，2

MRS啟動(dòng)子

MRS啟動(dòng)子

，3

終止子

終止子

，4

R1序列

R1序列

。經(jīng)

抗原抗體雜交技術(shù)

抗原抗體雜交技術(shù)

檢測(cè)，山羊成纖維細(xì)胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表達(dá)情況是

均降低（不表達(dá)）

均降低（不表達(dá)）

。
（3）欲用上述細(xì)胞獲得雙抗羊，需要用到的技術(shù)有

體細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植

體細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植

（至少寫出三項(xiàng)）。