結核病是由結核桿菌引起的人畜共患病。結核桿菌通常以氣溶膠形式傳播，氣溶膠顆粒被肺泡吞噬細胞吞噬，吞噬細胞破裂導致結核桿菌在機體內進一步傳播。羊癢病是由正常細胞的非致病性朊蛋白異構化為癢病朊蛋白所致。為研制既能抗結核病又能抗羊癢病的雙抗羊，科學家進行了如圖操作。
（1）小鼠SP110基因是目前發(fā)現的具有抗結核桿菌感染功能的基因。為了驗證SP110基因的功能，同時也為了驗證山羊吞噬細胞特異性啟動子MSR可以啟動SP110基因在吞噬細胞內的表達，設計以下三組實驗。實驗組將MRS啟動子與小鼠SP110基因形成融合基因，用
限制酶和DNA連接酶
限制酶和DNA連接酶
將融合基因與質粒構建成重組質粒，導入山羊肺泡吞噬細胞（組2）。以 轉入廣泛表達小鼠SP110基因的重組質粒的山羊吞噬細胞
轉入廣泛表達小鼠SP110基因的重組質粒的山羊吞噬細胞
（組3）和轉入空質粒的山羊吞噬細胞為對照組（組1）。分別接種等量的結核桿菌，72h后加入 蒸餾水
蒸餾水
使吞噬細胞破裂，取裂解液進行涂布培養(yǎng)，結果如圖1。由圖可知小鼠SP110基因可用于雙抗羊的研制，依據是 組2的吞噬細胞裂解后釋放的結核桿菌數量與組3接近，顯著小于組1
組2的吞噬細胞裂解后釋放的結核桿菌數量與組3接近，顯著小于組1
。
（2）非致病性朊蛋白是由山羊13號染色體上的PRNP基因的第三外顯子控制合成的，PRNP基因的結構如圖2。以L4和R1為識別位點設計TALEN敲除載體，對山羊成纖維細胞L4與R1之間的序列實施定點敲除。然后，將TALEN敲除載體與供體DNA載體共轉化幼羊成纖維細胞，可將SP110基因定點敲入PRNP基因的第三外顯子中，原理如圖3。請指出圖4中的數字分別代表的結構。1 L4序列
L4序列
，2 MRS啟動子
MRS啟動子
，3 終止子
終止子
，4 R1序列
R1序列
。經 抗原抗體雜交技術
抗原抗體雜交技術
檢測，山羊成纖維細胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表達情況是 均降低（不表達）
均降低（不表達）
。
（3）欲用上述細胞獲得雙抗羊，需要用到的技術有 體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植
體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植
（至少寫出三項）。
