基因工程重組亞單位疫苗是預(yù)防新冠病毒感染和傳播的一種有效方案，其原理是把新冠病毒上負(fù)責(zé)“生產(chǎn)”S蛋白的那部分基因找到，構(gòu)建體外重組表達(dá)載體，導(dǎo)入到微生物體內(nèi)，“生產(chǎn)”出需要的S蛋白制成疫苗。下圖是在體外構(gòu)建病毒S蛋白重組表達(dá)載體的實(shí)驗(yàn)流程及相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)?；卮鹣铝袉栴}：
| 限制酶 | BamHI | BclI | Sau3AI | HindIII |
| 識別序列及切割位點(diǎn) |
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（1）從患者肺部組織中分離并提取得到病毒RNA，通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
獲得S蛋白的cDNA，再通過 PCR
PCR
法對S蛋白的基因進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的一般步驟是 變性→復(fù)性→延伸
變性→復(fù)性→延伸
。（2）用圖1中的質(zhì)粒X和圖2中的S蛋白基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割，切割后通過 DNA連接
DNA連接
酶作用獲得重組質(zhì)粒。（3）轉(zhuǎn)化前，用含
Ca2+（CaCl2）
Ca2+（CaCl2）
的溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。轉(zhuǎn)化后，將大腸桿菌置于含 四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，方便篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌。為進(jìn)一步鑒定篩選出的大腸桿菌是否導(dǎo)入S蛋白基因，可用引物 甲、丙
甲、丙
進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；變性→復(fù)性→延伸；BclⅠ和HindⅢ；DNA連接；Ca2+（CaCl2）；四環(huán)素；甲、丙
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
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