利用新冠病毒（SARS-CoV-2）包膜表面的S蛋白研發(fā)的疫苗已在我國廣泛接種。如圖表示制備疫苗的相關過程，其中m、n分別是啟動子和終止子，箭頭處是限制酶的切點，SUC2是酵母菌的蔗糖轉化酶基因，其終產(chǎn)物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成單糖被細胞利用。下表是可供選擇使用的限制酶及其識別序列和切割位點。

限制酶	BamHⅠ	NheⅠ	NcoⅠ	SphⅠ	Sau3AⅠ
識別序列和切割位點	5′-G↓CTAGC-3′	5′-G↓GATCC-3′	5′-C↓CATGG-3′	5′-GCATG↓C-3′	5′-↓GATC-3′

（1）上圖②過程所使用的兩種酶是

NheI、NcoI

NheI、NcoI

，選擇兩種酶切割的優(yōu)點是

形成不同的黏性末端，防止質粒及目的基因自連及目的基因反接

形成不同的黏性末端，防止質粒及目的基因自連及目的基因反接

。
（2）由上圖推測，目的基因S表達的模板鏈是a鏈，理由是

目的基因的a鏈位于重組質粒的內(nèi)側，b鏈位于外側，轉錄方向為m→n,且轉錄只能從模板鏈的為3'端開始，因此a鏈是模板鏈

目的基因的a鏈位于重組質粒的內(nèi)側，b鏈位于外側，轉錄方向為m→n,且轉錄只能從模板鏈的為3'端開始，因此a鏈是模板鏈

；該目的基因的表達離不開m,原因是

基因表達包括轉錄和翻譯，啟動子m是RNA聚合酶識別和結合部位，有了它才能驅動基因的轉錄

基因表達包括轉錄和翻譯，啟動子m是RNA聚合酶識別和結合部位，有了它才能驅動基因的轉錄

。
（3）RT-PCR是將RNA逆轉錄（RT）和聚合酶鏈式反應（PCR）相結合的技術。利用S蛋白的RNA作為模板進行過程①，首先需要加入緩沖液、原料、酶Ⅰ、引物Ⅰ等物質后進行RT，獲得單鏈DNA后，還需要添加與單鏈DNA互補的引物Ⅱ及酶Ⅱ，在PCR過程中酶Ⅰ所處的狀態(tài)是

失活

失活

。以一個單鏈DNA為起點，進行n次循環(huán)的擴增，理論上需要

2^n-1

2^n-1

個引物Ⅱ；PCR每次循環(huán)一般可以分為變性、

復性

復性

、延伸三步。
（4）SUC2作為B上的標記基因，可以對導入B的酵母菌進行篩選。篩選時，需要使用以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基，對受體突變型酵母菌的要求是

不含SUC2基因或者SUC2基因被敲除

不含SUC2基因或者SUC2基因被敲除

。
（5）與普通滅活或減活疫苗相比，上述方法制備的疫苗對人體更安全，主要原因是

此疫苗不含新冠病毒的核酸，不會在人體內(nèi)增殖，僅注射病毒的部分蛋白進入人體，更安全

此疫苗不含新冠病毒的核酸，不會在人體內(nèi)增殖，僅注射病毒的部分蛋白進入人體，更安全

。