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菁優(yōu)網(wǎng)PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達該蛋白?；卮鹣铝袉栴}。
（1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的總RNA，再經(jīng)
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過程得到cDNA，將其作為PCR反應(yīng)的模板，并設(shè)計一對特異性引物來擴增目的基因。
（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識別序列及切割位點見下表。為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端分別引入
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和
PvuⅡ
PvuⅡ
兩種不同限制酶的識別序列。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，可選用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點（注：箭頭表示切割位點）
名稱 識別序列及切割位點 名稱 識別序列及切割位點
HindⅢ A↓AGCTT
TTCGA↑A		 EcoRⅠ G↓AATTC
CTTAA↑G
PvitⅡ CAG↓CTG
GTC↑GAC		 PstⅠ CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnⅠ G↓GATCC
CCATG↑G		 BamHⅠ G↓GTACC
CCTAG↑G
（3）目前常用PCR技術(shù)來擴增目的基因，原理是
DNA半保留復(fù)制
DNA半保留復(fù)制
，此技術(shù)設(shè)計引物很關(guān)鍵，引物的作用是
使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
。利用此技術(shù)擴增目的基因可以在PCR擴增儀中自動完成，完成以后，常采用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
來鑒定PCR的產(chǎn)物。
（4）基因工程的核心步驟是
基因表達載體的構(gòu)建
基因表達載體的構(gòu)建
，其中啟動子的作用是
它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位
它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位
。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄；EcoRⅠ；PvuⅡ；T4DNA連接酶；DNA半保留復(fù)制；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；瓊脂糖凝膠電泳；基因表達載體的構(gòu)建；它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：7引用：1難度：0.7
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    （1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地擴增目的基因的前提是需要
     
    ，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了
     
    。
    （2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達載體，還需要使用的酶是
     
    （答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、
     
    （答出3種）等結(jié)構(gòu)。
    （3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關(guān)步驟和實驗結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是
     
    。據(jù)表分析，該實驗結(jié)果說明
     
    。
    組別 實驗步驟 實驗結(jié)果
    ① ② ③
    轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組） 離心收集三組細
    胞制備可溶性蛋
    白質(zhì)樣品    		 將TI注射到大白
    兔體內(nèi)，獲取TI
    抗體    		 讓TI抗體和樣品
    進行混合檢測    		 有雜交帶
    非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組） 無雜交帶
    陽性對照組（C組） 有雜交帶

    發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

  • 菁優(yōu)網(wǎng)2．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
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    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
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    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
     
    。
    （3）導(dǎo)入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
     
    過程。
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    μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應(yīng)采用
     
    技術(shù)。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

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    發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7
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