大芻草是玉米的原始祖先，具有較強(qiáng)的抗病抗逆等特性，可為玉米育種提供原始的遺傳材料。研究發(fā)現(xiàn)，大芻草基因組中有一個(gè)D基因僅在體細(xì)胞（2n）和精子中正常表達(dá)，在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究D基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響，某小組設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)。據(jù)圖回答下列問題：

（1）大芻草D基因與Luc基因融合前需要利用

同一種限制酶

同一種限制酶

切割。融合后的少量D-Luc基因可以利用

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)

獲取大量的D-Luc融合基因。
（2）要構(gòu)建大芻草的DNA文庫，應(yīng)從大芻草

體細(xì)胞

體細(xì)胞

（填“卵細(xì)胞”“精子”“體細(xì)胞”或“體細(xì)胞或精子”）中提取總RNA，原因是

大芻草體細(xì)胞中有大芻草全部的DNA且D基因在體細(xì)胞中正常表達(dá)，而精子中一半的核DNA，卵細(xì)胞中D基因不能正常表達(dá)（不轉(zhuǎn)錄）

大芻草體細(xì)胞中有大芻草全部的DNA且D基因在體細(xì)胞中正常表達(dá)，而精子中一半的核DNA，卵細(xì)胞中D基因不能正常表達(dá)（不轉(zhuǎn)錄）

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（3）在過程①前，一般需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農(nóng)桿菌細(xì)胞，使其具備

吸收周圍環(huán)境中DNA分子

吸收周圍環(huán)境中DNA分子

的生理狀態(tài)。過程②轉(zhuǎn)化篩選。
（4）從轉(zhuǎn)入D-Luc融合基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一個(gè)染色體組，判定該胚是由未受精的卵細(xì)胞發(fā)育形成的，而一般情況下，大芻草卵細(xì)胞在未受精時(shí)不進(jìn)行發(fā)育，由此表明

D-Luc融合基因能在卵細(xì)胞中表達(dá)且使卵細(xì)胞不經(jīng)受精而直接發(fā)育成胚

D-Luc融合基因能在卵細(xì)胞中表達(dá)且使卵細(xì)胞不經(jīng)受精而直接發(fā)育成胚

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