黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉等多種真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,包括AFB1、AFB2、AFG1等多種衍生物。黃曲霉毒素的毒性強,具有抑制免疫、誘導突變和致癌的作用,香豆素是黃曲霉毒素的結構類似物。黃曲霉毒素的生物去除法是利用微生物分泌的酶降解黃曲霉毒素,產(chǎn)生低毒或無毒的降解產(chǎn)物。研究人員為篩選高效降解黃曲霉毒素的菌株,開展了相關的研究?;卮鹣铝袉栴}:
(1)配制的富集培養(yǎng)基和初篩平板培養(yǎng)基,常用
高壓蒸汽滅菌
高壓蒸汽滅菌
法進行滅菌。富集培養(yǎng)基的成分:香豆素0.1%、(NH4)2SO40.5%、NaCl0.85%、pH7.0;初篩平板培養(yǎng)基的成分:香豆素0.1%、(NH4)2SO40.5%、KH2PO40.25%、MgSO40.1%、Na2HPO4?12H2O 0.05%、CaCl2 0.01%、瓊脂2%、pH6.5。香豆素可用于篩選目的菌的原因是 香豆素的化學結構與黃曲霉毒素的類似,作為唯一碳源可使目的菌能夠生長而其他微生物生長受到抑制
香豆素的化學結構與黃曲霉毒素的類似,作為唯一碳源可使目的菌能夠生長而其他微生物生長受到抑制
。初篩平板培養(yǎng)基中無機物的主要作用是 提供無機鹽和維持培養(yǎng)基的pH穩(wěn)定
提供無機鹽和維持培養(yǎng)基的pH穩(wěn)定
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(2)從霉爛的花生殼、動物糞便中取樣,稀釋后將菌懸液加入到富集培養(yǎng)基中,適宜條件下富集培養(yǎng)三次。將富集培養(yǎng)的菌液用 平板劃線法或稀釋涂布平板
平板劃線法或稀釋涂布平板
法接種到初篩平板培養(yǎng)基上,適宜條件下培養(yǎng)后,挑選 單個菌落直徑較大
單個菌落直徑較大
的菌體進行純化培養(yǎng)。
(3)經(jīng)多輪篩選后獲得H菌株。搖瓶培養(yǎng)H菌株一段時間后取5mL發(fā)酵液進行離心,取950μL離心上清液加入5μL一定濃度的AFB1液,控制AFB,的終濃度1μg/mL。反應24h后經(jīng)萃取、溶解、過濾后檢測殘余AFB1的含量。該實驗還需要在 滅菌的發(fā)酵離心上清液
滅菌的發(fā)酵離心上清液
中加入等量的AFB1液作為空白對照。該步驟用于檢測 H菌株分泌的黃曲霉毒素降解酶的活力
H菌株分泌的黃曲霉毒素降解酶的活力
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