針對(duì)新冠病毒（SARS-CoV-2）的重組蛋白疫苗、核酸疫苗（包括 DNA疫苗和 RNA疫苗）等疫苗都在研發(fā)當(dāng)中。如圖為其中一種疫苗的研發(fā)思路，圖中①～⑦表示過程，虛線箭頭表示 NcoⅠ、SphⅠ、NheI、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)（四種酶的識(shí)別序列詳見表），標(biāo)記基因 SUC2控制合成蔗糖酶，使 P型酵母菌能利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存。

限制酶	NcoⅠ	SphⅠ	NheⅠ	BamHⅠ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)	C↓CATGG	GCATG↓C	G↓GATCC	G↓CTAGC

（1）圖中①過程需要使用

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

酶先得到cDNA，再使用

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）

技術(shù)擴(kuò)增得到S基因。
（2）為使③過程順利進(jìn)行，需先使用限制酶

Ncol

Ncol

和

Nhel

Nhel

切割質(zhì)粒B，選用兩種限制酶對(duì)新冠病毒的S基因進(jìn)行切割的目的是

防止S基因自身環(huán)化、防止S基因與運(yùn)載體反向連接

防止S基因自身環(huán)化、防止S基因與運(yùn)載體反向連接

（答出1點(diǎn)即可）。
（3）圖中表示篩選的過程是

⑤

⑤

（填編號(hào)），篩選時(shí)應(yīng)使用以

蔗糖

蔗糖

為唯一碳源的培養(yǎng)基。
（4）重組疫苗注入志愿者體內(nèi)后，S蛋白基因指導(dǎo)合成的S蛋白作為

抗原

抗原

，刺激機(jī)體產(chǎn)生能與之相結(jié)合的抗體，抗體的分泌量可作為檢測疫苗對(duì)志愿者免疫效果的指標(biāo)。參加臨床試驗(yàn)的志愿者需要滿足的條件之一是

無

無

（選填“有”或“無”）SARS-C。V-2感染史，理由是

有SARS-CoV-2感染史的志愿者血清中會(huì)存在一定量的相應(yīng)抗體，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾

有SARS-CoV-2感染史的志愿者血清中會(huì)存在一定量的相應(yīng)抗體，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾

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