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干燥綜合征（SS）是一種自身免疫病，患者血清中存在多種抗體，其中SSB抗體特異性最強?？蒲腥藛T為生產(chǎn)SSB抗體的檢測試劑，利用基因工程獲得重組SSB蛋白，流程如圖，請回答：
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（1）利用RNA通過①過程獲得CDNA需要
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶，從而獲得SSB基因，SSB基因通過PCR擴(kuò)增，其延伸階段需要
Taq（DNA聚合）或耐高溫DNA聚合
Taq（DNA聚合）或耐高溫DNA聚合
參與，而且在緩沖液中添加
Mg2+
Mg2+
以便激活該酶的活性。
（2）目的基因片段擴(kuò)增n代，共需要個
2n+1-2
2n+1-2
引物，共獲得
2n-2n
2n-2n
個短鏈、等長的目的基因。
（3）PCR循環(huán)之前，常要進(jìn)行一次預(yù)變性，預(yù)變性的目的是增加
模板DNA徹底變性
模板DNA徹底變性
的概率，用PCR方法擴(kuò)增目的基因時
不必
不必
（填“必須”或“不必”）知道基因的全部序列。
（4）為與PET41a質(zhì)粒連接，獲得的目的基因A兩端要含有
BamHⅠ和XhoⅠ
BamHⅠ和XhoⅠ
（寫出限制酶名稱）酶切位點。
（5）獲得含SSB基因的重組質(zhì)粒后，進(jìn)行如下實驗切割原質(zhì)粒和重組質(zhì)粒，獲得片段大小見表格（1kb=1000堿基對），分析數(shù)據(jù)，計算可得SSB基因的長度為
3kb
3kb
。與人基因組文庫中的SSB基因相比，通過①過程獲得的SSB基因結(jié)構(gòu)特點是
沒有啟動子和內(nèi)含子等
沒有啟動子和內(nèi)含子等
。
限制酶 EcoRⅠ BanHⅠ和XhoⅠ
原質(zhì)粒 8.1kb 2.7kb、5.4kb
重組質(zhì)粒 3.4kb、5.0kb 未做該處理
（6）②過程目的是將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到處于
感受態(tài)
感受態(tài)
的大腸桿菌內(nèi)，并接種于添加
卡那霉素
卡那霉素
的培養(yǎng)基上，收集菌落進(jìn)行簽定，將陽性菌落進(jìn)一步純化后再將菌體破碎處理，篩選得到重組SSB蛋白。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄；Taq（DNA聚合）或耐高溫DNA聚合；Mg2+；2n+1-2；2n-2n；模板DNA徹底變性；不必；BamHⅠ和XhoⅠ；3kb；沒有啟動子和內(nèi)含子等；感受態(tài)；卡那霉素
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/9/13 4:0:9組卷：11引用：2難度：0.5
相似題

  • 1．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
    （1）在進(jìn)行基因工程操作時，先要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是
     
    。
    （2）若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，其組成除了幾丁質(zhì)酶基因外，還包括
     
    、
     
    、
     
    ，其中
     
    與目的基因的轉(zhuǎn)錄開始有關(guān)。
    （3）當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是
     
    。
    （4）如何從個體水平鑒定轉(zhuǎn)基因植物有無抗真菌病的能力？
     
    。
    （5）若幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中獲得了轉(zhuǎn)基因植株，但植株抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是
     
    。

    發(fā)布：2024/10/31 8:0:1組卷：4引用：1難度：0.7

  • 2．油菜是世界上重要的油料作物，其生長期常受到病蟲害的危害，其中80%是由病原真菌引起。過去對油菜真菌病害的控制主要使用化學(xué)殺菌劑；真菌的細(xì)胞壁由幾丁質(zhì)組成，現(xiàn)利用外源幾丁質(zhì)酶基因（如圖1）注入油菜（本身無幾丁質(zhì)酶基因）中從而提高油菜的抗真菌能力，該過程利用了限制性核酸內(nèi)切酶（如圖2）。請回答下列問題：
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    （1）據(jù)圖2寫出酶BamHI酶切后形成的DNA片段的末端序列：
     
    。形成重組DNA分子時，含幾丁質(zhì)酶基因的DNA片段可能自身
     
    。
    （2）將重組DNA導(dǎo)入油菜細(xì)胞的常用方法是
     
    。為了檢測油菜細(xì)胞是否成功導(dǎo)入幾丁質(zhì)酶基因，可利用
     
    制成的探針進(jìn)行檢測。
    （3）將轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗，過程中需調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中
     
    的配比，幼苗可置于有
     
    的環(huán)境中，檢測幾丁質(zhì)酶基因是否成功表達(dá)。
    （4）采用化學(xué)殺蟲劑在消滅真菌病害的同時，也污染了
     
    （至少2種）等無機(jī)環(huán)境，更為重要的是使得
     
    迅速減少。

    發(fā)布：2024/10/31 8:0:1組卷：3引用：1難度：0.7

  • 3．已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-，根據(jù)圖示分析下列敘述正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/10/31 13:0:2組卷：46引用：2難度：0.7
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