干燥綜合征（SS）是一種自身免疫病，患者血清中存在多種抗體，其中SSB抗體特異性最強。科研人員為生產(chǎn)SSB抗體的檢測試劑，利用基因工程獲得重組SSB蛋白，流程如圖，請回答：
（1）利用RNA通過①過程獲得CDNA需要 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶，從而獲得SSB基因，SSB基因通過PCR擴增，其延伸階段需要 Taq（DNA聚合）或耐高溫DNA聚合Taq（DNA聚合）或耐高溫DNA聚合參與，而且在緩沖液中添加 Mg2+Mg2+以便激活該酶的活性。
（2）目的基因片段擴增n代，共需要個 2n+1-22n+1-2引物，共獲得 2n-2n2n-2n個短鏈、等長的目的基因。
（3）PCR循環(huán)之前，常要進行一次預(yù)變性，預(yù)變性的目的是增加 模板DNA徹底變性模板DNA徹底變性的概率，用PCR方法擴增目的基因時 不必不必（填“必須”或“不必”）知道基因的全部序列。
（4）為與PET41a質(zhì)粒連接，獲得的目的基因A兩端要含有 BamHⅠ和XhoⅠBamHⅠ和XhoⅠ（寫出限制酶名稱）酶切位點。
（5）獲得含SSB基因的重組質(zhì)粒后，進行如下實驗切割原質(zhì)粒和重組質(zhì)粒，獲得片段大小見表格（1kb=1000堿基對），分析數(shù)據(jù)，計算可得SSB基因的長度為 3kb3kb。與人基因組文庫中的SSB基因相比，通過①過程獲得的SSB基因結(jié)構(gòu)特點是 沒有啟動子和內(nèi)含子等沒有啟動子和內(nèi)含子等。
| 限制酶 | EcoRⅠ | BanHⅠ和XhoⅠ |
| 原質(zhì)粒 | 8.1kb | 2.7kb、5.4kb |
| 重組質(zhì)粒 | 3.4kb、5.0kb | 未做該處理 |
感受態(tài)
感受態(tài)
的大腸桿菌內(nèi)，并接種于添加 卡那霉素
卡那霉素
的培養(yǎng)基上，收集菌落進行簽定，將陽性菌落進一步純化后再將菌體破碎處理，篩選得到重組SSB蛋白。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；Taq（DNA聚合）或耐高溫DNA聚合；Mg2+；2n+1-2；2n-2n；模板DNA徹底變性；不必；BamHⅠ和XhoⅠ；3kb；沒有啟動子和內(nèi)含子等；感受態(tài)；卡那霉素
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/9/13 4:0:9組卷：11引用：2難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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