水稻不育系的選育是雜交水稻育種工作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。為了獲得某水稻品種的不育系，研究人員對該水稻品種的TMS5基因進(jìn)行編輯，基因編輯過程如圖。
（1）Cas9蛋白對TMS5基因剪切后（a），斷裂后的DNA分子會自動進(jìn)行修復(fù)，修復(fù)過程中在b所示位點插入堿基A之后兩個片段在

DNA連接酶

DNA連接酶

酶作用下得到編輯成功的TMS5基因，此過程導(dǎo)致的變異屬于

基因突變

基因突變

。
（2）在編輯成功的TMS5基因上游連接啟動子，可作為

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別和結(jié)合的部位，后組裝形成基因表達(dá)載體。再通過農(nóng)桿菌侵染水稻愈傷組織，并整合到水稻細(xì)胞的

染色體DNA

染色體DNA

上，愈傷組織再經(jīng)過

再分化

再分化

過程形成水稻幼苗。
（3）基因編輯中插入堿基A，會導(dǎo)致翻譯提前終止，使TMS5基因表達(dá)的蛋白質(zhì)不能產(chǎn)生，最終導(dǎo)致水稻花粉不育。用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測TMS5基因編輯是否成功，若

未出現(xiàn)

未出現(xiàn)

（填“出現(xiàn)”或“未出現(xiàn)”）雜交帶，則表明基因編輯成功。
（4）華人科學(xué)家張鋒是首個將CRISPR基因編輯技術(shù)應(yīng)用于哺乳動物和人類細(xì)胞的科學(xué)家，為此項技術(shù)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域做出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。但是更多的學(xué)者提出了CRISRP/Cas9基因編輯技術(shù)有時存在編輯對象出錯而造成“脫靶”，實驗發(fā)現(xiàn)RNA的序列長短影響成功率，越短脫靶率越

高

高

。試分析脫靶最可能的原因：

其他DNA序列也含有與向?qū)NA互補(bǔ)配對的序列，造成向?qū)NA錯誤結(jié)合而脫靶

其他DNA序列也含有與向?qū)NA互補(bǔ)配對的序列，造成向?qū)NA錯誤結(jié)合而脫靶

。