抗凝血酶是一種天然抗凝血劑，在臨床上被廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家已在豬和羊等動物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了人的抗凝血酶，如圖是構(gòu)建抗凝血酶基因表達(dá)載體所用的pBR質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及人抗凝血酶基因所在的DNA片段，回答下列問題：

（1）現(xiàn)有以下4種引物，引物A15'-GGACCCCGGG-3'；引物B：5'-CATTTCTAGA-3'；引物C：5'-CCTGGGGCCC-3'；引物D：5'-GTAAAGATCT-3'；，利用PCR擴(kuò)增獲取抗凝血酶基因，應(yīng)選用引物

A和D

A和D

（填引物名稱），擴(kuò)增產(chǎn)物可選擇限制酶

Xma I和BglⅡ

Xma I和BglⅡ

切割后再利用E?coliDNA連接酶連接到pBR質(zhì)粒上。
（2）所選用的pBR質(zhì)粒上含有啟動子，其作用是

RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄

RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄

，將構(gòu)建的基因表達(dá)載體先導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上，長出了多個(gè)大腸桿菌菌落，這些菌落并非都是目的菌株，原因是

導(dǎo)入不含目的基因（空載）的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長

導(dǎo)入不含目的基因（空載）的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長

。
（3）將篩選得到的目的菌株提取質(zhì)粒，再通過

顯微注射

顯微注射

方法導(dǎo)入到豬或羊的

受精卵

受精卵

細(xì)胞內(nèi)，通過培養(yǎng)即可獲得能表達(dá)人抗凝血酶的乳腺生物反應(yīng)器。