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新冠病毒在人體細胞表面蛋白受體由ACE2控制表達，該基因的開放閱讀框（mRNA 從起始密碼子到終止密碼子之間的核苷酸序列）cDNA序列大小為2418bp（bp表示堿基對），在280bp和1070bp位點分別有一個HindⅢ和Xho I酶切位點（圖1）。甲、乙兩位同學通過分子生物學方法克隆該基因到 pMD18-T載體（圖2）中，各自的測序結(jié)果如圖4，并進一步通過雙酶切獲得ACE2基因編碼序列與pEGFP-N1（圖2）載體重組（MCS多酶切位點序列如圖3所示）并表達。試分析回答下列問題：
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（1）根據(jù)圖2可知，兩種載體都具有的基本結(jié)構(gòu)有
復制原點
復制原點
和
標記基因
標記基因
限制酶切割位點。
（2）ACE2基因與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)化后細胞需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中篩選的原因是
載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr
載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr
。
（3）甲、乙兩位同學均得到ACE2基因的PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體的重組質(zhì)粒，針對ACE2基因的部分測序結(jié)果如圖4，并進一步利用圖4中標記的限制酶進行雙酶切，獲得ACE2基因編碼序列，同時用相同限制酶酶切 pEGFP-N1載體，然后構(gòu)建重組質(zhì)粒。兩位同學對獲得的重組質(zhì)粒進行酶切檢測：①甲同學只得到空載體；②乙同學在重組質(zhì)粒中檢測到了1348 bp 部分目的基因片段。請對該實驗結(jié)果進行分析：
①
甲同學用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒
甲同學用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒
。
②
乙同學用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個XhoⅠ酶切位點，酶切后便可以得到一個1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒
乙同學用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個XhoⅠ酶切位點，酶切后便可以得到一個1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒
。

【答案】復制原點；標記基因；載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr；甲同學用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒；乙同學用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp，ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個XhoⅠ酶切位點，酶切后便可以得到一個1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：1引用：1難度：0.6
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  • 1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運用交錯延伸PCR技術獲得了抗蟲性能強的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　　）
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    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　　）
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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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