基因工程可以按照人們的意愿賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品，下圖1是基因工程的基本操作流程。近十年來(lái)，PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里的一種常規(guī)手段，其原理是利用DNA半保留復(fù)制，在試管中進(jìn)行DNA的人工復(fù)制（如圖2），在很短的時(shí)間內(nèi)，將DNA擴(kuò)增幾百萬(wàn)倍甚至幾十億倍，使實(shí)驗(yàn)所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）圖1中①過(guò)程所需的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

②過(guò)程所需的酶是

限制性內(nèi)切核酸酶

限制性內(nèi)切核酸酶

。
（2）若圖1中④過(guò)程為將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，最常用的方法是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

。
（3）圖1中⑤過(guò)程是

目的基因的檢測(cè)與鑒定

目的基因的檢測(cè)與鑒定

，要檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)，首先從轉(zhuǎn)基因生物個(gè)體中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行

抗原—抗體

抗原—抗體

雜交。
（4）圖2中加熱94℃目的是打開(kāi)

氫

氫

鍵，這一步稱為變性。當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板

3'

3'

端結(jié)合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成兩個(gè)DNA分子。
（5）圖2中PCR技術(shù)的必要條件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少還需要三個(gè)條件，即：液體環(huán)境、適宜的溫度和

酸堿度

酸堿度

，前者由PCR儀自動(dòng)調(diào)控，后者則靠

緩沖液

緩沖液

來(lái)維持。
（6）DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是

DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈

DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈

。退火溫度的設(shè)置跟引物有關(guān)，若

引物中GC含量高

引物中GC含量高

，退高溫度可以高點(diǎn)；若退火溫度太低，會(huì)造成引物的特異性下降，不但會(huì)造成非目標(biāo)DNA片段多，而且會(huì)出現(xiàn)無(wú)序擴(kuò)增。
（7）科研人員利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增其染色體上的16SrRNA保守片段，然后通過(guò)DNA序列比對(duì)進(jìn)行菌種親源關(guān)系的鑒定。查找數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)該放線菌的16SrRNA目的基因片段及相應(yīng)限制酶識(shí)別序列如圖所示：

為了獲得目的基因16SrRNA，需要使用的限制酶是

EcoRI

EcoRI

和

SacI

SacI

。得到目的基因以后就可以利用PCR技術(shù)對(duì)16SrRNA進(jìn)行體外擴(kuò)增，此過(guò)程需要加入

Taq酶

Taq酶

催化。