基因工程可以按照人們的意愿賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品，下圖1是基因工程的基本操作流程。近十年來，PCR技術（多聚酶鏈式反應）成為分子生物學實驗室里的一種常規(guī)手段，其原理是利用DNA半保留復制，在試管中進行DNA的人工復制（如圖2），在很短的時間內，將DNA擴增幾百萬倍甚至幾十億倍，使實驗所需要的遺傳物質不再受限于活的生物體。請據圖回答下列問題：
（1）圖1中①過程所需的酶是 逆轉錄酶逆轉錄酶②過程所需的酶是 限制性內切核酸酶限制性內切核酸酶。
（2）若圖1中④過程為將目的基因導入植物細胞，最常用的方法是 農桿菌轉化法農桿菌轉化法。
（3）圖1中⑤過程是 目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定，要檢測目的基因是否成功表達，首先從轉基因生物個體中提取蛋白質，用相應的抗體進行 抗原—抗體抗原—抗體雜交。
（4）圖2中加熱94℃目的是打開 氫氫鍵，這一步稱為變性。當溫度降低時，引物與模板 3'3'端結合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成兩個DNA分子。
（5）圖2中PCR技術的必要條件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少還需要三個條件，即：液體環(huán)境、適宜的溫度和 酸堿度酸堿度，前者由PCR儀自動調控，后者則靠 緩沖液緩沖液來維持。
（6）DNA的復制需要引物，其主要原因是 DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈。退火溫度的設置跟引物有關，若 引物中GC含量高引物中GC含量高，退高溫度可以高點；若退火溫度太低，會造成引物的特異性下降，不但會造成非目標DNA片段多，而且會出現無序擴增。
（7）科研人員利用PCR技術大量擴增其染色體上的16SrRNA保守片段，然后通過DNA序列比對進行菌種親源關系的鑒定。查找數據庫發(fā)現該放線菌的16SrRNA目的基因片段及相應限制酶識別序列如圖所示：
為了獲得目的基因16SrRNA，需要使用的限制酶是 EcoRIEcoRI和 SacISacI。得到目的基因以后就可以利用PCR技術對16SrRNA進行體外擴增，此過程需要加入 Taq酶Taq酶催化。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】逆轉錄酶；限制性內切核酸酶；農桿菌轉化法；目的基因的檢測與鑒定；抗原—抗體；氫；3'；酸堿度；緩沖液；DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈；引物中GC含量高；EcoRI；SacI；Taq酶
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：2難度：0.6
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經過次復制。第一次PCR的產物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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