表觀遺傳調(diào)節(jié)異常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一，N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物mRNA上最常見的一種修飾。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌細(xì)胞中存在m6A去甲基化酶（ALKBH5）過(guò)表達(dá)和STC2（癌癥相關(guān)基因）mRNA的m6A修飾水平降低的異?，F(xiàn)象?？蒲腥藛T利用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)ALKBH5基因沉默和STC2基因的過(guò)表達(dá)，以研究ALKBH5介導(dǎo)的m6A甲基化修飾對(duì)胃癌細(xì)胞遷移的影響。
（1）已知STC2基因的α鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，據(jù)圖1分析，利用PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要在引物
C
C
的5'端添加BamHⅠ識(shí)別序列和強(qiáng)啟動(dòng)子序列，在引物 B
B
的5'端添加SacⅠ識(shí)別序列。
（2）為確保目的基因正確插入質(zhì)粒，需要選擇 BamHⅠ、SacⅠ
BamHⅠ、SacⅠ
限制酶切割質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌體時(shí)，可利用潮霉素和卡那霉素篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，試簡(jiǎn)要表述篩選思路：依次使用含卡那霉素的培養(yǎng)基和含潮霉素的培養(yǎng)基篩選，能夠在含卡那霉素培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而不能在含潮霉素培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的大腸桿菌即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌
依次使用含卡那霉素的培養(yǎng)基和含潮霉素的培養(yǎng)基篩選，能夠在含卡那霉素培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而不能在含潮霉素培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的大腸桿菌即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌
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（3）研究人員分別用不同方式處理胃癌細(xì)胞，并測(cè)得胃癌細(xì)胞遷移標(biāo)志蛋白含量如圖3。根據(jù)結(jié)果推測(cè)ALKBH5基因影響胃癌遷移的機(jī)理是 ALKBH5基因過(guò)表達(dá)導(dǎo)致ST2基因表達(dá)的mRNA去甲基化，進(jìn)而導(dǎo)致STC2基因過(guò)表達(dá)而引起癌細(xì)胞遷移
ALKBH5基因過(guò)表達(dá)導(dǎo)致ST2基因表達(dá)的mRNA去甲基化，進(jìn)而導(dǎo)致STC2基因過(guò)表達(dá)而引起癌細(xì)胞遷移
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