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菁優(yōu)網(wǎng)如圖所示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列。
回答下列問題：
（1）限制酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷裂。
（2）用限制酶SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8，上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶Bgl1/酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
1.4
1.4
kb,且目的基因中含有
1
1
個(gè)BglⅡ切割位點(diǎn)。
表1
PLJ702 pZHZ8
BglⅡ 5.7kb 6.7kb
（3）導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成
轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
過程。
（4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
5
5
μg/mL以上，且菌落的顏色為
白色
白色
。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，首先需檢測受體細(xì)胞的
RNA
RNA
（填“DNA”或“RNA”），檢測方法采用
分子雜交
分子雜交
技術(shù)。
表2
固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（μg/mL） 0 1 2 5 10
不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 ++++ +++ + - -

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】磷酸二酯鍵；1.4；1；轉(zhuǎn)化；5；白色；RNA；分子雜交
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/5/15 8:0:8組卷：8引用：2難度：0.6
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  • 1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運(yùn)用交錯(cuò)延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項(xiàng)正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注：①交錯(cuò)延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細(xì)胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　　）
    菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
    菁優(yōu)網(wǎng)
    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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