圖甲為構(gòu)建重組質(zhì)粒過程中的三種備選質(zhì)粒，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。圖乙為培育轉(zhuǎn)AFPs基因（抗凍基因）番茄的示意圖，外源DNA和質(zhì)粒上均標(biāo)出了酶切位點及相關(guān)抗性基因。請回答下列問題：
?
（1）圖甲中通常選用質(zhì)粒C構(gòu)建重組質(zhì)粒，不選用質(zhì)粒A和B的原因分別是

質(zhì)粒A中沒有標(biāo)記基因

質(zhì)粒A中沒有標(biāo)記基因

、

質(zhì)粒B的復(fù)制原點中含有HindⅢ酶切位點，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會破壞復(fù)制原點

質(zhì)粒B的復(fù)制原點中含有HindⅢ酶切位點，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會破壞復(fù)制原點

。
（2）據(jù)圖乙分析，若成功構(gòu)建重組質(zhì)粒以利于篩選鑒定，應(yīng)優(yōu)先選用兩種限制酶

BamHⅠ、HindⅢ

BamHⅠ、HindⅢ

切割目的基因和質(zhì)粒，采用兩種限制酶的優(yōu)點是

保證目的基因與質(zhì)粒定向連接

保證目的基因與質(zhì)粒定向連接

。農(nóng)桿菌中的Ti-質(zhì)粒應(yīng)含有T-DNA，其作用是

攜帶目的基因進入番茄細胞并整合到番茄細胞的染色體DNA

攜帶目的基因進入番茄細胞并整合到番茄細胞的染色體DNA

。在構(gòu)建基因表達載體過程中常把兩個啟動子串聯(lián)在一起形成雙啟動子，加在目的基因上游，雙啟動子的作用可能是

保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄（高效表達）

保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄（高效表達）

。
（3）圖丙中的A鏈和B鏈來自于AFPs基因。欲利用PCR技術(shù)對AFPs基因進行擴增，需要添加

Taq

Taq

酶，應(yīng)選取的引物是

引物2、引物3

引物2、引物3

，循環(huán)4次需要的引物數(shù)量是

30

30

個。
（4）為使改造后的AFPs基因能夠表達，人工設(shè)計質(zhì)粒D并對它的多個酶切位點進行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶單獨切割質(zhì)粒D，均獲得一條長鏈，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同時切割，則獲得2個500bp和1個2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同時切割，則獲得2個250bp和1個3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位點為計算起點，則KpnⅠ酶切割位點與HindⅢ酶切割位點最短長度為

750bp

750bp

，EcoRⅠ酶的兩個切割位點與HindⅢ切割位點的最短距離為

500bp

500bp

。