我國是世界產(chǎn)棉大國,棉花產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的1/4。但是棉花病蟲害非常多,尤其是蟲害,直接影響了棉花的產(chǎn)量。轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的研發(fā)成功,為棉花的增收做出了巨大的貢獻(xiàn)?;卮鹣铝袉栴}:
(1)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉所需的殺蟲基因,可用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增。擴(kuò)增過程中需要將溫度冷卻至55~60℃,目的是
降溫使兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對原則與兩條單鏈DNA結(jié)合
降溫使兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對原則與兩條單鏈DNA結(jié)合
。獲得大量殺蟲基因后,還需利用兩種酶構(gòu)建基因表達(dá)載體。為了使殺蟲基因和質(zhì)粒能正確地成功拼接,一般操作方法是 準(zhǔn)備兩種不同的限制酶,對殺蟲基因所在DNA片段和質(zhì)粒均進(jìn)行雙酶切,再使用DNA連接酶將殺蟲基因和質(zhì)粒連接起來
準(zhǔn)備兩種不同的限制酶,對殺蟲基因所在DNA片段和質(zhì)粒均進(jìn)行雙酶切,再使用DNA連接酶將殺蟲基因和質(zhì)粒連接起來
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(2)將殺蟲基因?qū)朊藁?xì)胞有多種方法,我國獨(dú)創(chuàng)的方法是 花粉管通道法
花粉管通道法
,另外還可以利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法讓另殺蟲基因的遺傳特性在棉花細(xì)胞里得以穩(wěn)定維持和表達(dá),理由是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使Ti質(zhì)粒上插入了殺蟲基因的的T-DNA整合到棉花細(xì)胞的染色體DNA上
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使Ti質(zhì)粒上插入了殺蟲基因的的T-DNA整合到棉花細(xì)胞的染色體DNA上
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(3)殺蟲基因?qū)朊藁?xì)胞后,可利用放射性同位素標(biāo)記的目的基因的DNA片段作為 基因探針
基因探針
,目的是檢測 目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞
目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞
。若是利用抗原一抗體雜交技術(shù),結(jié)果顯示出雜交帶,則說明 殺蟲基因在棉花細(xì)胞中成功表達(dá)出對應(yīng)蛋白質(zhì)
殺蟲基因在棉花細(xì)胞中成功表達(dá)出對應(yīng)蛋白質(zhì)
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(4)除了上述的分子檢測外,有時(shí)還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。簡述在個(gè)體水平鑒定殺蟲基因是否成功表達(dá)的實(shí)驗(yàn)思路:讓害蟲分別吞食轉(zhuǎn)基因棉花和普通棉花的葉片,觀察害蟲的存活情況,如果普通棉花組害蟲存活,轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲死亡,則說明殺蟲基因成功表達(dá),若轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲不死亡,則說明殺蟲基因沒有成功表達(dá)
讓害蟲分別吞食轉(zhuǎn)基因棉花和普通棉花的葉片,觀察害蟲的存活情況,如果普通棉花組害蟲存活,轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲死亡,則說明殺蟲基因成功表達(dá),若轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲不死亡,則說明殺蟲基因沒有成功表達(dá)
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