酵母細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄需要轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄因子包括DNA結(jié)合功能域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（DNA-AD），兩結(jié)構(gòu)域分開時不能激活轉(zhuǎn)錄。如果將待測蛋白質(zhì)X與DNA-BD融合，蛋白質(zhì)Y與DNA-AD融合，蛋白質(zhì)X和Y有相互作用時，兩結(jié)構(gòu)域能重新呈現(xiàn)完整轉(zhuǎn)錄因子活性，并可激活報告基因的轉(zhuǎn)錄，過程如圖1所示。已知報告基因LacZ表達的酶可以將無色化合物X-gal水解成藍(lán)色產(chǎn)物。研究人員為了驗證蛋白質(zhì)X和Y是否具有相互作用，分別構(gòu)建不同的酵母表達載體（如圖2和圖3所示），其中Ampr為氨芐青霉素（抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的形成）抗性基因，HIS3和TRPⅠ分別為控制組氨酸和色氨酸合成的基因。請回答下列問題：
（1）研究小組采用了巢式PCR技術(shù)獲取蛋白質(zhì)X和Y基因的編碼區(qū)序列，技術(shù)原理是利用兩套PCR引物進行兩輪PCR擴增（如圖4所示），首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進行15～30個循環(huán)的擴增；第二輪擴增以第一輪擴增產(chǎn)物為模板，利用第二對引物（內(nèi)引物或巢式引物）進行15～30個循環(huán)擴增。相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言，巢式PCR獲得的產(chǎn)物特異性 強強（“強”或“弱”），原因是 如果利用外引物擴增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低如果利用外引物擴增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低。
（2）研究人員的主要技術(shù)路線如表所示，請完善下表：
| 實驗?zāi)康?/td> | 方法步驟要點（部分） |
| 獲取X和Y基因的編碼區(qū)序列 | 巢式PCR擴增蛋白質(zhì)Y編碼區(qū)序列時需在兩個① 內(nèi) 內(nèi) （填寫“內(nèi)”、“外”或“內(nèi)和外”）引物的5?端分別添加序列②GAATTC 和 CTCGAG GAATTC 和 CTCGAG ；為驗證目的基因在PCR擴增時是否發(fā)生了基因突變，可對PCR產(chǎn)物進行③DNA 測序（測序） DNA 測序（測序） 。 |
| pLexA-JL和pB42AD載體的構(gòu)建 | 用特定限制酶切割目的基因和載體并連接，連接產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌后擴增；為確定質(zhì)粒構(gòu)建是否成功，需要抽提兩種質(zhì)粒并酶切， 電泳后觀察④ 是否出現(xiàn)預(yù)期大小的目標(biāo)條帶 是否出現(xiàn)預(yù)期大小的目標(biāo)條帶 。 |
| 轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞 | 將成功構(gòu)建的載體通過⑤ Ca2+處理（感受態(tài)細(xì)胞） Ca2+處理（感受態(tài)細(xì)胞） 法導(dǎo)入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌中，培養(yǎng)基中需添加物質(zhì)有⑥def def （用下列字母填寫）。a.氨芐青霉素 b.色氨酸 c.亮氨酸 d.X-gal e.瓊脂 f.甲硫氨酸 |
| 實驗驗證 | 通過觀察培養(yǎng)基中⑦ 菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍(lán)色） 菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍(lán)色） 來驗證蛋白質(zhì)X和Y是否具有相互作用。 |
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。A.在細(xì)胞體內(nèi)檢測抗原和抗體能否發(fā)生相互作用
B.判斷控制某一性狀的兩對基因是否能夠獨立遺傳
C.判斷RNA聚合酶與某啟動子的結(jié)合是否具有組織特異性
D.篩選宿主細(xì)胞上能與新冠病毒S刺突蛋白特異性結(jié)合的受體
【答案】強；如果利用外引物擴增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低；內(nèi)；GAATTC 和 CTCGAG；DNA 測序（測序）；是否出現(xiàn)預(yù)期大小的目標(biāo)條帶；Ca2+處理（感受態(tài)細(xì)胞）；def；菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍(lán)色）；AD
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：25引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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