使用胰島素能有預(yù)防腎臟移植后糖尿病的發(fā)生，但同時也會降低患者的免疫細胞對免疫抑制劑的敏感性。為驗證胰島素會降低免疫細胞對免疫抑制劑的敏感性，根據(jù)提供的實驗材料，完善實驗思路，預(yù)測實驗結(jié)果，并進行分析與討論。
實驗材料：PBMC細胞懸液（人外周血單個核細胞，主要是淋巴細胞和單核細胞）、細胞培養(yǎng)液、一系列不同濃度的環(huán)孢素、胰島素、S961、錐形瓶等。
（要求與說明：免疫抑制劑的作用程度可用半致死量IC50表示、即在規(guī)定時間內(nèi)一半免疫細胞死亡時使用的免疫抑制劑濃度，環(huán)孢素是一種免疫抑制劑，S961是一種胰島素受體拮抗劑；實驗中涉及的劑量不作具體要求：實驗條件適宜）
（1）完善實驗思路：
①取錐形瓶若干，隨即均分成4組，編號為A、B、C、D，分別加入等量適量PBMC細胞懸液和細胞培養(yǎng)液，用MTT法檢測各組活細胞數(shù)量并記錄。
A組：加入適量細胞培養(yǎng)液；
B組：加入等量適宜濃度的胰島素溶液；
C組：加入 等量一系列不同濃度的環(huán)孢素等量一系列不同濃度的環(huán)孢素，作為對照；
D組：加入 等量胰島素和一系列不同濃度的環(huán)孢素等量胰島素和一系列不同濃度的環(huán)孢素。
②按上述分組加入相應(yīng)試劑后。將培養(yǎng)瓶放入CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96h,用MTT法檢測各組活細胞數(shù)量并記錄，計算C、D組的 細胞存活率細胞存活率，并得出C、D組環(huán)孢素的IC50。
（2）預(yù)測實驗結(jié)果：完善坐標(biāo)圖。并用曲線表示C、D組的實驗結(jié)果。
（3）①患者腎臟移植后，須使用免疫抑制劑的原因是 免疫抑制劑能降低免疫系統(tǒng)對移植器官的排斥，提高移植器官的存活率免疫抑制劑能降低免疫系統(tǒng)對移植器官的排斥，提高移植器官的存活率。
②若實驗中A、B組的細胞存活情況相同，說明 外源胰島素對PBMC細胞無毒性外源胰島素對PBMC細胞無毒性。
③進一步研究發(fā)現(xiàn)PBMC細胞中 胰島素受體胰島素受體的表達量增加，說明胰島素可能是直接作用于免疫細胞，提高了其活性。為了證明此作用，可增加一組實驗組，該組的處理是 胰島素+環(huán)孢素D組IC50+S961胰島素+環(huán)孢素D組IC50+S961。
【考點】免疫學(xué)的應(yīng)用．
【答案】等量一系列不同濃度的環(huán)孢素；等量胰島素和一系列不同濃度的環(huán)孢素；細胞存活率；免疫抑制劑能降低免疫系統(tǒng)對移植器官的排斥，提高移植器官的存活率；外源胰島素對PBMC細胞無毒性；胰島素受體；胰島素+環(huán)孢素D組IC50+S961
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：9引用：1難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：5引用：3難度：0.7 -
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（1）滅活疫苗方案具有技術(shù)方案簡單、成熟度高、研發(fā)快速的優(yōu)點，但作用效果低，即在體外培養(yǎng)新冠病毒，經(jīng)過滅活減毒處理后注入人體刺激其產(chǎn)生。
（2）若制備腺病毒載體新冠病毒疫苗，首先需要在作用下，以新冠病毒的遺傳物質(zhì)RNA為模板經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA；此外，還需要酶參與，才能制備重組的腺病毒，該步驟在基因工程中被稱為；
（3）核酸疫苗，也稱基因疫苗，是指將含有編碼的蛋白基因序列的質(zhì)粒載體導(dǎo)入宿主體內(nèi)，通過宿主細胞表達抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主細胞產(chǎn)生對該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，以達到預(yù)防和治療疾病的目的。核酸疫苗制備更加簡易，更加安全，使用更加方便。下面是制作關(guān)于2019-nCoV的RNA疫苗的簡化過程：擴增該病毒的某種基因→插入病毒復(fù)制子中→病毒自我復(fù)制并提取mRNA→混入載體（如脂質(zhì)體）中。而DNA疫苗的制備方法為將2019-nCoV的基因插入基因表達載體，并提取質(zhì)粒使用。在擴增該病毒的某種基因時，可用（請寫完整中文名稱）技術(shù)，擴增時的三個階段分別變性，復(fù)性和；擴增時需加入引物，如擴增n次，則需要引物個；引物不宜過短的原因是。
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