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菁優(yōu)網(wǎng)基因敲除是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術?？茖W家常借助基因敲除技術，使特定的基因功能喪失，從而使部分功能被屏蔽，并可進一步對生物體造成影響，進而推測出該基因的生物學功能。來源于λ噬菌體的Red同源重組系統(tǒng)就可用于大腸桿菌等一系列工程菌的基因敲除。
（1）Red同源重組由λ噬菌體的exo、bet、gam3個基因組成，分別編碼EXO、BET、GAM3種蛋白質(zhì)，EXO為雙鏈核酸外切酶，可以結(jié)合在雙鏈DNA的末端，產(chǎn)生3′黏性末端；BET結(jié)合在EXO外切產(chǎn)生的末端單鏈上，促進其與受體細胞內(nèi)正在復制的靶序列進行同源重組，替換靶基因；GAM蛋白能夠抑制受體細胞內(nèi)核酸外切酶活性，進而
抑制
抑制
（選填“抑制”或“促進”）受體細胞對外源DNA的降解。
（2）Red同源重組技術要用到質(zhì)粒pKD46，該質(zhì)粒含有溫度敏感型的復制起點oriR101，在30℃培養(yǎng)時可以正常復制，而高于37℃時會自動丟失；還有由ParaB啟動子調(diào)控的exo、bet、gam基因，需要L-阿拉伯糖誘導表達。λ-Red系統(tǒng)介導的基因敲除過程如圖所示。
①將pKD46導入處于
感受態(tài)
感受態(tài)
（某種狀態(tài)）的大腸桿菌，為使pKD46在細菌內(nèi)正常復制、Red重組酶正常合成，必需滿足
培養(yǎng)溫度為30℃，且培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖
培養(yǎng)溫度為30℃，且培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖
的培養(yǎng)條件。過程I是用含有青霉素的培養(yǎng)基篩選成功導入了pKD46的大腸桿菌，這說明
實驗用大腸桿菌不含青霉素抗性基因（或在含青霉素培養(yǎng)基中不能存活）且pKD46質(zhì)粒含有青霉素抗性基因
實驗用大腸桿菌不含青霉素抗性基因（或在含青霉素培養(yǎng)基中不能存活）且pKD46質(zhì)粒含有青霉素抗性基因
。
②用PCR技術擴增卡那霉素抗性基因，將獲得的線性DNA片段導入大腸桿菌，通過同源重組將大腸桿菌基因組DNA上的特定靶基因敲除。
③為篩選出同源重組成功（即靶基因被敲除）的大腸桿菌，過程II所用的培養(yǎng)基必需含有
卡那霉素
卡那霉素
；然后在
高于37℃的溫度下培養(yǎng)
高于37℃的溫度下培養(yǎng)
，把質(zhì)粒pKD46除去。
④Red同源重組技術要用到質(zhì)粒pKD46，該質(zhì)粒含有ParaB啟動子，負責調(diào)控exo、bet、gam基因，ParaB啟動子的作用是
是RNA聚合酶識別及結(jié)合的部位，驅(qū)動exo、bet、gam基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
是RNA聚合酶識別及結(jié)合的部位，驅(qū)動exo、bet、gam基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
。

【答案】抑制；感受態(tài)；培養(yǎng)溫度為30℃，且培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖；實驗用大腸桿菌不含青霉素抗性基因（或在含青霉素培養(yǎng)基中不能存活）且pKD46質(zhì)粒含有青霉素抗性基因；卡那霉素；高于37℃的溫度下培養(yǎng)；是RNA聚合酶識別及結(jié)合的部位，驅(qū)動exo、bet、gam基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：2難度：0.5
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)模化生產(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復制模板
    菁優(yōu)網(wǎng)
    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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