qRT-PCR又稱實時熒光定量PCR，是一種在DNA擴增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測定每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物的總量，間接對待測樣品中特定DNA序列進行定量分析的方法。qRT-PCR實驗步驟：反轉(zhuǎn)錄→擴增→檢測。qRT-PCR目前主要應(yīng)用于基因表達水平的檢測。請回答下列有關(guān)問題：
（1）反轉(zhuǎn)錄：在逆轉(zhuǎn)錄（或反轉(zhuǎn)錄）逆轉(zhuǎn)錄（或反轉(zhuǎn)錄）酶的作用下，mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA分子；cDNA與原基因相比，在結(jié)構(gòu)上的不同點有cDNA中不具有啟動子和終止子等調(diào)控因子cDNA中不具有啟動子和終止子等調(diào)控因子。
（2）擴增：用PCR擴增cDNA，首先要制備22種引物，以便為熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）酶提供結(jié)合位點，并從引物的3′3′（填“5′”或“3′”）端開始拼接單個的脫氧核苷酸。
（3）檢測：利用熒光標(biāo)記的化學(xué)物質(zhì)是4種脫氧核苷酸（或dNTP）4種脫氧核苷酸（或dNTP），隨著PCR反應(yīng)的進行熒光信號強度也等比例增加。
（4）qRT-PCR對基因表達的檢測僅限于轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄水平，而對于翻譯水平的檢測常用的方法是抗原一抗體雜交實驗抗原一抗體雜交實驗。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄（或反轉(zhuǎn)錄）；cDNA中不具有啟動子和終止子等調(diào)控因子；2；熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）；3′；4種脫氧核苷酸（或dNTP）；轉(zhuǎn)錄；抗原一抗體雜交實驗
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：1難度：0.7
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導(dǎo)入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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