在基因工程的操作過程中，有多種方法可檢測目的基因是否導入受體菌?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR檢測法：根據(jù)一段已知目的基因的核苷酸序列設(shè)計
引物
引物
，對受體菌DNA進行擴增，經(jīng)過解鏈、
復性（退火）
復性（退火）
、延伸三個步驟的循環(huán)，檢測PCR產(chǎn)物的長度是否與目的基因一致。
（2）熒光蛋白基因篩選法：某種熒光蛋白（GFP）在紫外線照射下會發(fā)出綠色熒光。用
DNA連接
DNA連接
酶將目的基因和GFP基因拼接成融合基因，并與
運載體
運載體
重組后導入受體菌，經(jīng)培養(yǎng)篩選能發(fā)出綠色熒光的菌落。
（3）環(huán)絲氨酸輔助篩選法：四環(huán)素能使細菌停止生長但不致死；環(huán)絲氨酸能使正常生長的細菌致死，而對停止生長的細菌不致死。某質(zhì)粒如圖所示（Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因），Tet^r中插入目的基因后失活。用此質(zhì)粒構(gòu)建表達載體，轉(zhuǎn)化細菌后，結(jié)果有3種：未轉(zhuǎn)化的細菌、含質(zhì)粒的細菌、含重組質(zhì)粒的細菌。
①用含有
四環(huán)素
四環(huán)素
和
環(huán)絲氨酸
環(huán)絲氨酸
的培養(yǎng)基對上述3種細菌進行篩選，只有含質(zhì)粒的細菌被淘汰，理由是
含質(zhì)粒的細菌有Tet^r，四環(huán)素對其不起作用；環(huán)絲氨酸使其致死
含質(zhì)粒的細菌有Tet^r，四環(huán)素對其不起作用；環(huán)絲氨酸使其致死
；
②在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選出含重組質(zhì)粒的細菌，還需使用含有的
氨芐青霉素
氨芐青霉素
培養(yǎng)基。

【答案】引物；復性（退火）；DNA連接；運載體；四環(huán)素；環(huán)絲氨酸；含質(zhì)粒的細菌有Tet^r，四環(huán)素對其不起作用；環(huán)絲氨酸使其致死；氨芐青霉素

【解答】

【點評】

聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。

發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：47引用：3難度：0.6

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1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細胞壁的單細胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達載體，并將其導入鹽藻細胞中，進行了一系列實驗。回答下列問題：
（1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地擴增目的基因的前提是需要

，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了

。
（2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達載體，還需要使用的酶是

（答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、

（答出3種）等結(jié)構(gòu)。
（3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關(guān)步驟和實驗結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是

。據(jù)表分析，該實驗結(jié)果說明

。

組別實驗步驟實驗結(jié)果

① ② ③

轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組）離心收集三組細
胞制備可溶性蛋
白質(zhì)樣品將TI注射到大白
兔體內(nèi)，獲取TI
抗體讓TI抗體和樣品
進行混合檢測有雜交帶

非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組）無雜交帶

陽性對照組（C組）有雜交帶

發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

A．科學家已對Bt基因的序列信息、表達產(chǎn)物等有了較為深入的了解

B．篩選Bt基因后可以利用PCR技術(shù)對其進行大量的擴增

C．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的核心工作是將Bt基因?qū)朊藁毎?/label>

D．檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功首先要進行分子水平的檢測

發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7

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固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL）	0	1	2	5	10
不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況	+++++	+++	+	-	-