已知組成型啟動子可以高效地啟動目的基因在植物各種組織中的表達，但常會阻礙植物的生長發(fā)育。誘導型啟動子可在特定環(huán)境條件下誘導目的基因的表達。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強的抗旱作用?？蒲腥藛T通過構(gòu)建AmDHN基因表達載體，以培育耐旱苜蓿新品種，所用載體如圖1所示，請回答下列問題：
（1）用載體1構(gòu)建含AmDHN目的基因的表達載體，可以成功轉(zhuǎn)化苜蓿，但會出現(xiàn)抑制抗性芽生長和抗性植株生根的現(xiàn)象，推測33S啟動子屬于 組成型組成型啟動子。
（2）圖2是科研人員擴增Rd29A啟動子所設(shè)計的引物，根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識別序列分析，構(gòu)建載體2時選用的限制酶是 SacⅠ和SmaⅠSacⅠ和SmaⅠ。為了改造載體1中的啟動子，需要用 BclⅠ和SacⅠBclⅠ和SacⅠ酶切割載體1、2為最佳。
（3）構(gòu)建Rd29A啟動子驅(qū)動AmDHN基因的表達載體后，先將其導入 農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌，再轉(zhuǎn)化苜蓿。轉(zhuǎn)化后應在培養(yǎng)基中添加 新霉素新霉素進行篩選。
（4）為檢測轉(zhuǎn)基因苜蓿中AmDHN基因的表達水平，科研人員做了相關(guān)實驗。下表呈現(xiàn)了部分操作步驟，請完成表格：
| 實驗步驟的目的 | 簡要操作過程 |
| ① 使幼苗適應外界的自然環(huán)境（進行煉苗） 使幼苗適應外界的自然環(huán)境（進行煉苗） |
在轉(zhuǎn)基因無菌苗根系長至2-3 cm時，將培養(yǎng)無菌苗三角瓶的封口膜打開，培養(yǎng)一周，觀察其生長狀況 |
| 提供適宜生長條件 | 將甲組幼苗根系至于300mL水中 |
| 模擬干旱脅迫條件 | ② 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 |
| 無關(guān)變量控制 | 將甲、乙兩組置于溫度、光照等條件適宜且相同的環(huán)境中培養(yǎng)8h,之后剪取兩組葉片放在液氮中儲存 |
| ③ 檢測PCR擴增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達量 檢測PCR擴增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達量 |
對葉片研磨、離心后，提取總RNA，以 AmDHN和 MtActin基因兩端脫氧核苷酸序列為依據(jù)設(shè)計引物，進行RT-PCR擴增，其中MtActin（一種細胞骨架蛋白）為內(nèi)參。擴增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，EB（澳化乙錠＞染色照相如圖。 |
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】組成型；SacⅠ和SmaⅠ；BclⅠ和SacⅠ；農(nóng)桿菌；新霉素；使幼苗適應外界的自然環(huán)境（進行煉苗）；將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中；檢測PCR擴增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達量
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/9/12 15:0:9組卷：5引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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