維生素C是人與動物必需的營養(yǎng)成分，因有抗氧化作用而廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)。中國科技工作者發(fā)明的維生素C“二步發(fā)酵法”生產(chǎn)工藝是世界首創(chuàng)：第一步發(fā)酵用醋酸桿菌為菌種，第二步發(fā)酵用氧化葡萄糖酸桿菌（“小菌”）和假單胞桿菌（“大菌”）混合菌種。如圖為二步發(fā)酵法的生產(chǎn)流程，請回答有關(guān)問題：

（1）醋酸桿菌產(chǎn)生的醋酸能夠溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。為純化和保存醋酸桿菌，將一步發(fā)酵液抽樣稀釋，用

稀釋涂布平板

稀釋涂布平板

法接種在含有碳酸鈣粉的培養(yǎng)基上，以

C

C

 （ 填字母）為最佳指標(biāo)，分離保存菌種。
A.菌落直徑大小
B.溶鈣圈大小
C.溶鈣圈直徑與菌落直徑的比值
（2）對一步發(fā)酵培養(yǎng)液檢測發(fā)現(xiàn)幾乎沒有雜菌存在，推測可能的原因是

培養(yǎng)液呈酸性抑制雜菌的生長

培養(yǎng)液呈酸性抑制雜菌的生長

。
（3）二步發(fā)酵過程中大小菌的菌種數(shù)比例會影響產(chǎn)酸率，種液接人發(fā)酵罐前需對種液中的大小菌計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)所用的培養(yǎng)基除含有與發(fā)酵液相同的成分外，還需添加

瓊脂

瓊脂

，根據(jù)

菌落的特征（大小、顏色、形狀或隆起程度）

菌落的特征（大小、顏色、形狀或隆起程度）

對培養(yǎng)基中的大小菌進(jìn)行鑒別并分別計(jì)數(shù)?，F(xiàn)某檢測員將種液稀釋后接種了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)假單胞桿菌的菌落數(shù)分別是30、100和200，取平均值110。該結(jié)果可信度低，原因是

數(shù)據(jù)值間差距太大，重復(fù)性差

數(shù)據(jù)值間差距太大，重復(fù)性差

。
（4）若要嘗試固定化混合菌進(jìn)行二步發(fā)酵來生產(chǎn)古龍酸，你認(rèn)為固定化混合菌操作時(shí)要注意哪些方面？

大小菌的混合比例、避免包埋方法對菌種活性影響、避免包埋時(shí)混入雜菌等

大小菌的混合比例、避免包埋方法對菌種活性影響、避免包埋時(shí)混入雜菌等

。 （寫出兩點(diǎn)）