炎癥性腸?。↖BD）是一種易導(dǎo)致結(jié)腸癌的慢性疾病，患者腸道內(nèi)會(huì)產(chǎn)生硫代硫酸鹽?？蒲腥藛T以小鼠為研究對(duì)象，建立了圖1所示的炎癥性腸病檢測模型，GFP基因是綠色熒光蛋白基因。
（1）據(jù)圖分析，可以通過檢測熒光強(qiáng)弱來判定小鼠腸道內(nèi)硫代硫酸鹽的濃度，其原因是

硫代硫酸鹽能夠解除R蛋白對(duì)啟動(dòng)子B的抑制作用，使GFP基因表達(dá)，發(fā)出綠色熒光

硫代硫酸鹽能夠解除R蛋白對(duì)啟動(dòng)子B的抑制作用，使GFP基因表達(dá)，發(fā)出綠色熒光

。
（2）研究者利用基因工程技術(shù)構(gòu)建含硫代硫酸鹽檢測傳感器的大腸桿菌工程菌，通過PCR擴(kuò)增R基因時(shí)應(yīng)該選擇的引物是

引物1和引物4

引物1和引物4

，在A、B兩端引物的5′端需添加的限制酶識(shí)別序列為

GGATCC

GGATCC

和

CTGCAG

CTGCAG

。
限制酶識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)如表：

限制酶	HindⅢ	BamHⅠ	PastⅠ	EcoRⅠ	BglⅡ
識(shí)別序列（5′→3′）	A↓AGCTT	G↓GATCC	C↓TGCAG	G↓AATTC	A↓GATCT

（3）研究發(fā)現(xiàn)患者腸道內(nèi)硫代硫酸鹽的生成量與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。為簡化疾病診斷和精確用藥，科研人員開發(fā)了智能工程菌?？蒲腥藛T將抗炎蛋白基因與硫代硫酸鹽特異性誘導(dǎo)激活的啟動(dòng)子P連接，構(gòu)建出圖3所示表達(dá)載體（部分片段），導(dǎo)入用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理的大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，選用啟動(dòng)子P的優(yōu)點(diǎn)是

僅在IBD發(fā)生時(shí)才表達(dá)抗炎蛋白且能精準(zhǔn)治療IBD

僅在IBD發(fā)生時(shí)才表達(dá)抗炎蛋白且能精準(zhǔn)治療IBD

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