甲植物細胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細胞進行體細胞雜交相關(guān)研究，基本過程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣铝袉栴}：
（1）根據(jù)研究目標，在甲、乙兩種植物細胞進行體細胞雜交前，應(yīng)檢驗兩種植物的原生質(zhì)體是否具備

再生

再生

的能力。為了便于觀察細胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的

葉

葉

為外植體。
（2）植物細胞壁的主要成分為

纖維素

纖維素

和果膠，在獲取原生質(zhì)體時，常采用相應(yīng)的酶進行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對原生質(zhì)體進行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的

細胞質(zhì)基因和細胞核基因

細胞質(zhì)基因和細胞核基因

失活。對處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用

血細胞計數(shù)板

血細胞計數(shù)板

計數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1：1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進行融合；一定時間后，加入過量的培養(yǎng)基進行稀釋，稀釋的目的是

降低PEG濃度，使其失去促融合作用

降低PEG濃度，使其失去促融合作用

。
（3）將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨立生長、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細胞源于

同一個雜種融合原生質(zhì)體

同一個雜種融合原生質(zhì)體

。下列各項中能說明這些愈傷組織只能來自于雜種細胞的理由是哪幾項？

ABD

ABD

A．甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無法正常生長、分裂
B．同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長、分裂
C．培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細胞才能正常生長、分裂
D．雜種細胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長、分裂
（4）愈傷組織經(jīng)

再分化

再分化

可形成胚狀體或芽。胚狀體能長出

根和芽

根和芽

，直接發(fā)育形成再生植株。
（5）用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細胞核具有特異性DNA序列a,乙植物細胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M₁、M₂為序列a的特異性引物，N₁、N₂為序列b的特異性引物。完善實驗思路：
Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴增的

模板

模板

。
Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系，

M₁、M₂

M₁、M₂

為特異性引物，擴增序列a；用同樣的方法擴增序列b。
Ⅲ．得到的2個PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)

凝膠電泳

凝膠電泳

后，若每個PCR擴增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的

1

1

個條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細胞。