甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，基本過(guò)程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細(xì)胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）根據(jù)研究目標(biāo)，在甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗(yàn)兩種植物的原生質(zhì)體是否具備

再生

再生

的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的

葉

葉

為外植體。
（2）植物細(xì)胞壁的主要成分為

纖維素

纖維素

和果膠，在獲取原生質(zhì)體時(shí)，常采用相應(yīng)的酶進(jìn)行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的

細(xì)胞質(zhì)基因和細(xì)胞核基因

細(xì)胞質(zhì)基因和細(xì)胞核基因

失活。對(duì)處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

計(jì)數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1：1混合后，通過(guò)添加適宜濃度的PEG進(jìn)行融合；一定時(shí)間后，加入過(guò)量的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，稀釋的目的是

降低PEG濃度，使其失去促融合作用

降低PEG濃度，使其失去促融合作用

。
（3）將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨(dú)立生長(zhǎng)、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于

同一個(gè)雜種融合原生質(zhì)體

同一個(gè)雜種融合原生質(zhì)體

。下列各項(xiàng)中能說(shuō)明這些愈傷組織只能來(lái)自于雜種細(xì)胞的理由是哪幾項(xiàng)？

ABD

ABD

A．甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無(wú)法正常生長(zhǎng)、分裂
B．同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長(zhǎng)、分裂
C．培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細(xì)胞才能正常生長(zhǎng)、分裂
D．雜種細(xì)胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長(zhǎng)、分裂
（4）愈傷組織經(jīng)

再分化

再分化

可形成胚狀體或芽。胚狀體能長(zhǎng)出

根和芽

根和芽

，直接發(fā)育形成再生植株。
（5）用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細(xì)胞核具有特異性DNA序列a,乙植物細(xì)胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M₁、M₂為序列a的特異性引物，N₁、N₂為序列b的特異性引物。完善實(shí)驗(yàn)思路：
Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴(kuò)增的

模板

模板

。
Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系，

M₁、M₂

M₁、M₂

為特異性引物，擴(kuò)增序列a；用同樣的方法擴(kuò)增序列b。
Ⅲ．得到的2個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)

凝膠電泳

凝膠電泳

后，若每個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的

1

1

個(gè)條帶，則可初步確定再生植株來(lái)自于雜種細(xì)胞。