四尾柵藻生長周期短、適應性強，是一種高潛力生物柴油新型原料，但油脂產量低。研究人員從含油量高的紫蘇中提取DGAT1（催化油脂合成的關鍵酶）基因，并成功導入到四尾柵藻細胞內，獲得轉基因的產油四尾柵藻。其制備流程如圖，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，LacZ基因可使細菌利用培養(yǎng)基中的物質X-gal進而使菌落呈現(xiàn)藍色，無該基因或該基因被破壞，菌落呈白色。回答下列問題：
（1）從高表達的紫蘇組織細胞中提取總的RNA，經逆轉錄獲得cDNA，用于PCR擴增。該過程獲得cDNA的原理是
在逆轉錄酶作用下，以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA
在逆轉錄酶作用下，以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA
。
（2）PCR擴增DGAT1基因時，使反應體系中的模板cDNA解旋為單鏈的條件是加熱至90～95℃
加熱至90～95℃
。在DNA延伸的過程中，使用砌酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活
Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活
。
（3）構建的pMD19-DGAT1導入到經CaCl2溶液處理的感受態(tài)大腸桿菌細胞中，并通過稀釋涂布平板法
稀釋涂布平板法
（方法）接種到含X-gal和氨芐青霉素
X-gal和氨芐青霉素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。一段時間后，挑選白
白
色的菌落以提取質粒pMD19-DGAT1。
（4）用限制酶BamHI和XbaI切割pMD19-DGAT1和pBI121，將其連接成重組表達載體pBI121-DGAT1，并將其導入四尾柵藻細胞中。與單酶切相比，雙酶切的優(yōu)點是使DGAT1基因能定向插入表達載體，減少自身環(huán)化
使DGAT1基因能定向插入表達載體，減少自身環(huán)化
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