新冠病毒是一種單鏈RNA病毒，常用“熒光RT-PCR技術”（實時熒光逆轉錄聚合酶鏈式反應）進行檢測，如圖1所示。該過程中當TaqMan探針完整時，熒光基團（R）發(fā)出的熒光信號被淬滅基團（Q）吸收而不發(fā)熒光；到探針水解釋放出游離的R和Q，R發(fā)出的熒光信號被相應儀器檢測到，熒光信號的累積與PCR產物數(shù)量完全同步。請分析并回答下列問題。
（1）“熒光RT-PCR技術”所用的試劑盒中應該含有：檢測者mRNA、熒光標記的新冠病毒核酸探針、耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）、逆轉錄酶逆轉錄酶、脫氧核苷酸（dNTP）脫氧核苷酸（dNTP）、2種引物、含 Mg2+Mg2+（離子）的緩沖體系。
（2）PCR循環(huán)中，加入的引物作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。引物、探針與模板結合發(fā)生在 復性復性階段。探針核苷酸序列的設計依據(jù)是新冠病毒RNA內部的一段核糖核苷酸序列（新冠病毒RNA逆轉錄形成的DNA的部分核糖核苷酸序列）新冠病毒RNA內部的一段核糖核苷酸序列（新冠病毒RNA逆轉錄形成的DNA的部分核糖核苷酸序列）。
（3）每擴增一個DNA便釋放一個熒光信號，從而實現(xiàn)熒光信號的積累與PCR產物的完全同步。最終可以得到一條熒光擴增曲線，如圖2所示。熒光一般要達到或超過閾值時才確診為感染了新冠病毒?，F(xiàn)有甲、乙兩個待檢樣本，檢測時都出現(xiàn)了圖示形態(tài)的曲線，但甲的a點比乙的a點明顯左移。在試劑盒合格且正常，操作過程規(guī)范且準確的前提下，該現(xiàn)象出現(xiàn)的原因是甲樣本中的新病毒含量較 高高，達到視值所需的循環(huán)數(shù)更少少。
（4）常采用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產物，設置如下：1號泳道為標準（Marker），2號泳道是為陽性對照組，3號泳道為實驗組。圖3中3號泳道出現(xiàn)雜帶，原因一般有 引物設計不合理；復性溫度偏低；DNA聚合酶的質量不好等引物設計不合理；復性溫度偏低；DNA聚合酶的質量不好等（至少寫出2點）。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；逆轉錄酶；脫氧核苷酸（dNTP）；Mg2+；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；復性；新冠病毒RNA內部的一段核糖核苷酸序列（新冠病毒RNA逆轉錄形成的DNA的部分核糖核苷酸序列）；高；少；瓊脂糖凝膠電泳；引物設計不合理；復性溫度偏低；DNA聚合酶的質量不好等
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：9引用：1難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經過次復制。第一次PCR的產物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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