《傷寒論》中記載的芍藥甘草湯是由芍藥和甘草兩味藥物制成,具有調(diào)和肝脾,緩急止痛的作用,芍藥和甘草的主要活性成分分別為芍藥苷和甘草酸。科研團(tuán)隊(duì)通過制備抗芍藥苷的單克隆抗體,將其純化后結(jié)合在固相載體上,讓芍藥甘草湯流過,去除湯中芍藥苷,用于探究芍藥苷與芍藥甘草湯對小鼠鎮(zhèn)痛作用的相關(guān)性?;卮鹣铝袉栴}。
(1)制備單克隆抗體時(shí),將芍藥苷與蛋白質(zhì)結(jié)合作為抗原,定期間隔免疫小鼠,目的是
獲得大量分泌芍藥苷抗體的B淋巴細(xì)胞(獲得能產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞)
獲得大量分泌芍藥苷抗體的B淋巴細(xì)胞(獲得能產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞)
取免疫后的小鼠脾臟,剪碎并用 胰蛋白(或膠原蛋白)
胰蛋白(或膠原蛋白)
酶處理得到小鼠脾臟細(xì)胞,圖中誘導(dǎo)其與骨髓瘤細(xì)胞融合的試劑X是 聚乙二醇
聚乙二醇
,經(jīng)選擇培養(yǎng)篩選出的細(xì)胞Y具有 既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生抗體
既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生抗體
特點(diǎn)。
(2)用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞Y并收集上清液,利用 抗原抗體雜交
抗原抗體雜交
技術(shù)對上清液進(jìn)行抗體陽性檢測。選擇陽性孔中的細(xì)胞繼續(xù)植入小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng),可從 小鼠腹水
小鼠腹水
中提取到抗芍藥苷的單克隆抗體。
(3)研究人員將生理狀態(tài)相同的小鼠隨機(jī)分為對照組、造模組進(jìn)行如下處理,造模組前期已完成冰醋酸致痛處理(冰醋酸能引起深部的、大面積且較持久的疼痛刺激,此時(shí)小鼠會(huì)出現(xiàn)扭體反應(yīng))。請完善實(shí)驗(yàn)方案。
組別 |
前期處理 |
后期處理 |
對照組 |
腹腔注射生理鹽水 |
I |
造模組 |
腹腔注射冰醋酸 |
模型組:口服生理鹽水 |
陽性藥組:口服芍藥甘草湯 |
實(shí)驗(yàn)組:Ⅱ |
a.腹腔注射生理鹽水b.口服芍藥甘草湯c.口服去除芍藥苷的芍藥甘草湯
①表中I、Ⅱ分別進(jìn)行的處理是
a
a
、
c
c
(用上述字母表示)。
②結(jié)果與分析:
若前期處理后,造模組小鼠扭體次數(shù)顯著
高于
高于
對照組,表明致痛處理成功。后期處理結(jié)束后測定各組小鼠扭體次數(shù),若結(jié)果為
實(shí)驗(yàn)組小鼠扭體次數(shù)高于陽性藥組低于模型組
實(shí)驗(yàn)組小鼠扭體次數(shù)高于陽性藥組低于模型組
,則表明芍藥苷是芍藥甘草湯中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的重要成分之一。