24．I、當(dāng)前新冠疫情仍在全球蔓延。疫苗的研制和快速準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)是應(yīng)對(duì)疫情的有力措施?；卮鹣铝袉?wèn)題。
（1）腺病毒是研制疫苗的常用載體，圖1是構(gòu)建含新冠病毒S蛋白（抗原）基因的重組腺病毒表達(dá)載體示意圖。
①以病毒作為基因工程的載體，其優(yōu)點(diǎn)是可以利用病毒具有
的特點(diǎn)，易將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。圖1中構(gòu)建的腺病毒表達(dá)載體需含有S蛋白基因、標(biāo)記基因、
等組件。
②圖1中四種限制酶的切割位點(diǎn)和識(shí)別序列如下表所示，構(gòu)建腺病毒表達(dá)載體時(shí)需使用限制酶
和
切割腺病毒基因和新冠病毒的S蛋白基因，選用這兩種限制酶切割的主要原因是
（答出1點(diǎn)即可）。
| 限制酶 |
NcoI |
SphI |
NheI |
BamHI |
| 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) |
C↓CATGGG |
CATG↓C |
G↓CTAGC |
G↓GATCC |
（2）臨床上常采用RT-PCR技術(shù)，對(duì)受測(cè)者咽拭子取樣后進(jìn)行新冠病毒核酸檢測(cè)。RT-PCR是指以病毒的RNA為模板合成cDNA，并對(duì)cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增的過(guò)程。在此過(guò)程中，需要用Taq酶和
酶，其中PCR過(guò)程需要
原料。
II、為了定量測(cè)定樣品中病毒核酸，常采用實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增技術(shù)，該技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，需額外添加熒光標(biāo)記探針（每個(gè)目的基因結(jié)合1分子探針）。當(dāng)探針完整時(shí)，不產(chǎn)生熒光，當(dāng)探針被Taq酶水解時(shí)，R與Q分離，可檢測(cè)到R發(fā)出的熒光，如圖2所示。
（3）若樣本中含有目的基因，引物和探針與目的基因通過(guò)形成
（化學(xué)鍵）特異性結(jié)合。據(jù)圖2分析，探針的水解，發(fā)生在PCR過(guò)程
階段。
（4）在熒光定量PCR技術(shù)中，Ct值的含義是“每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)”，據(jù)此分析，當(dāng)樣本中初始模板越多，Ct值就
。
（5）若每分子探針?biāo)忉尫诺腞基團(tuán)熒光強(qiáng)度為a,加入模板DNA數(shù)為b,則反應(yīng)體系中熒光信號(hào)強(qiáng)度（Rn）與擴(kuò)增次數(shù)（n）之間的關(guān)系為：Rn=
。
