小立碗蘚是具有高效同源重組率的苔蘚植物，科學(xué)家利用同源重組交換的原理對(duì)小立碗蘚進(jìn)行基因敲除來(lái)研究某目的基因的功能?；蚯贸^(guò)程是先構(gòu)建基因敲除載體，將基因敲除載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，經(jīng)過(guò)篩選找出基因敲除成功的植株?；蚯贸砣鐖D所示：

注：抗生素抗性基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)卡那霉素有抗性；1、2為實(shí)現(xiàn)同源重組交換的序列，3、4、5、6為其他不同的基因片段；G-up-f、G-down-r、35sp-r、35st-f、Gene-f、Gene-r為引物；1、2序列發(fā)生同源重組，使得野生型小立碗蘚DNA上的目的基因被抗生素抗性基因替換。
（1）小立碗蘚目的基因敲除載體的受體細(xì)胞是原生質(zhì)體。要制備小立碗蘚的原生質(zhì)體，常用的酶是

纖維素酶和果膠酶

纖維素酶和果膠酶

。制備原生質(zhì)體時(shí)，兩種酶應(yīng)該溶解在

等于

等于

（填“大于”“小于”或“等于”）細(xì)胞液濃度的外界溶液中，原因是

若濃度過(guò)低原生質(zhì)體會(huì)吸水漲破，若濃度過(guò)高則會(huì)失水皺縮

若濃度過(guò)低原生質(zhì)體會(huì)吸水漲破，若濃度過(guò)高則會(huì)失水皺縮

。將構(gòu)建好的目的基因敲除載體導(dǎo)入原生質(zhì)體，然后將原生質(zhì)體放在含

卡那霉素

卡那霉素

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，對(duì)能存活的植物提取基因組DNA，用引物

Gene-f、Gene-r

Gene-f、Gene-r

進(jìn)行PCR擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)后進(jìn)行電泳，如果沒(méi)有目的基因條帶，則確定目的基因敲除成功。
（2）若1，2序列特異性差，則目的基因敲除載體可能會(huì)與非目的基因序列發(fā)生同源重組，造成目的基因敲除失敗。若用G-up-f、G-down-r進(jìn)行擴(kuò)增，

不能

不能

（填“能”或“不能”）確定野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，原因是

無(wú)論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，擴(kuò)增的結(jié)果都有條帶

無(wú)論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，擴(kuò)增的結(jié)果都有條帶

。
（3）動(dòng)物減數(shù)分裂過(guò)程中，可能發(fā)生類(lèi)似上述抗生素抗性基因替換目的基因的過(guò)程，具體時(shí)期是在

減數(shù)分裂Ⅰ前期（或四分體時(shí)期）

減數(shù)分裂Ⅰ前期（或四分體時(shí)期）

。