某廠發(fā)酵使用的谷氯酸棒狀桿菌已經出現(xiàn)了明顯的“退化”，呈現(xiàn)長勢差、發(fā)酵效價不高、質量不好等現(xiàn)象，研究人員利用保存的菌種，通過激光照射谷氨酸酸棒狀桿菌原生質體選育出了高產、優(yōu)質的谷氨酸棒狀桿菌菌種?；卮鹣铝袉栴}：
（1）制備谷氨酸棒狀桿菌原生質體時，常用酶解法去壁。酶解后，用較高滲透壓緩沖液經過多次洗滌離心獲得原生質體，多次洗滌的目的是 為了洗去酶液，防止其對原生質體造成破壞為了洗去酶液，防止其對原生質體造成破壞。谷氨酸棒狀桿菌原生質體經過激光照射后，接種于培養(yǎng)基上再生出細胞壁，用涂布器將 稀釋稀釋后的再生菌液涂布接種到高糖、高谷氨酸的固體培養(yǎng)基上，形成單菌落后再進行鑒定和擴大培養(yǎng)。
（2）選育出的高產優(yōu)質菌種一般接種在斜面培養(yǎng)基上保存，在低溫干燥等條件下通過減少菌種的 傳代傳代次數(shù)來減少菌種發(fā)生自發(fā)突變的概率，開展工業(yè)發(fā)酵時，將保存的菌種 活化活化后再擴大培養(yǎng)，最后接種于培養(yǎng)基中，初期調節(jié)培養(yǎng)基C/N為4：1有利于 菌體大量繁殖菌體大量繁殖，后期調整C/N為3：1以獲得大量谷氨酸產物。
（3）與利用糖蜜相比，用大米、小麥作為谷氨酸發(fā)酵的原料需要增加 將淀粉分解成小分子糖將淀粉分解成小分子糖的過程，從生產發(fā)酵罐底部通入高溫蒸汽一方面可以使淀粉等受熱吸水從細胞壁中釋放出來，另一方面也可以起到 滅菌滅菌的作用。
（4）生物素是脂肪酸合成的必需物質，發(fā)酵使用的谷氨酸棒狀桿菌常為生物素缺陷型菌株，可以減少組成細胞膜的 磷脂磷脂分子的合成，有利于 增大細胞膜通透性，谷氨酸能及時排出胞外增大細胞膜通透性，谷氨酸能及時排出胞外，從而降低谷氨酸合成的負反饋作用。
（5）谷氨酸棒狀桿菌還被用于工業(yè)化生產丙酮酸，為了增加其代謝過程中丙酮酸的積累，研究人員利用同源重組的方法敲除了與丙酮酸分解代謝有關的基因A，獲得了A基因缺失工程菌，實驗過程包括：
I.基因敲除打靶質粒的構建。利用PCR技術擴增出A基因的上下游序列，融合成一個DNA片段，PCR反應體系中的原料是 四種dNTP四種dNTP；然后用兩種 限制性內切核酸酶限制性內切核酸酶分別切割融合片段和質粒，再用DNA連接酶連接形成重組質粒。
Ⅱ.重組質粒的導入。將野生型谷氨酸棒狀桿菌放入低溫、低濃度的CaCl2溶液中，使之成為 感受態(tài)感受態(tài)細胞，再利用電轉化法轉入重組質粒。一段時間后將菌液涂布于平板上獲得單菌落。
Ⅲ.目標菌的鑒定。選取單菌落，破壁后加入2mol/L的NaCl溶液，離心后取上清液，然后加入 95%的冷酒精95%的冷酒精，得到白色DNA，將DNA提取物加入PCR反應體系，利用A基因的特異性引物開展擴增，擴增產物經過電泳后，凝膠中出現(xiàn) 00個條帶，可以初步確定該菌落是目標菌。最后通過發(fā)酵檢測丙酮酸產量作為基因敲除成功的直接證據(jù)。
【答案】為了洗去酶液，防止其對原生質體造成破壞；稀釋；傳代；活化；菌體大量繁殖；將淀粉分解成小分子糖；滅菌；磷脂；增大細胞膜通透性，谷氨酸能及時排出胞外；四種dNTP；限制性內切核酸酶；感受態(tài)；95%的冷酒精；0
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/30 13:42:58組卷：22引用：3難度：0.5
相似題
-
1．下列有關傳統(tǒng)發(fā)酵技術和微生物培養(yǎng)技術中的操作，錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 2:30:2組卷：45引用：3難度：0.7 -
2．下列對發(fā)酵工程及其應用的敘述，正確的有幾項（ ?。?br />①生產谷氨酸需將pH調至酸性
②生產檸檬酸需要篩選產酸量高的黑曲霉
③發(fā)酵工程的產品主要包括微生物的代謝物及菌體本身
④利用發(fā)酵工程生產的根瘤菌肥作為微生物農藥可以促進植物生長
⑤啤酒的工業(yè)化生產過程中，酒精的產生積累主要在后發(fā)酵階段完成
⑥可用誘變育種或基因工程等方法選育出性狀優(yōu)良的菌種并進行擴大培養(yǎng)
⑦用單細胞蛋白制成的微生物飼料，可通過發(fā)酵工程從微生物細胞中提取發(fā)布：2024/12/30 22:0:1組卷：12引用：6難度：0.7 -
3．γ-氨基丁莜（GABA）是有助于睡眠、祛毒和醒酒等作用的水溶性氨基酸。如圖是腐乳在前發(fā)酵和腌制過程中GABA含量的變化，下列敘述錯誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:0:2組卷：3引用：3難度：0.7
相關試卷