Cre重組酶最早于1981年在P1噬菌體中發(fā)現(xiàn)，該酶由343個氨基酸組成，除了擁有催化活性外，同時還可以識別特定序列Loxp位點，該位點同樣在P1噬菌體中被發(fā)現(xiàn)，序列長度為34bp。
（1）一個Loxp位點被Cre重組酶切割后會水解 22個磷酸二酯鍵。請畫出載體A被Cre重組酶切割后產生的黏性末端 
。
（2）在目的基因兩端加上Loxp序列后，有助于將目的基因與載體重組。利用PCR技術對目的基因B改造，關鍵是引物的設計，引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧孩苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧孩苷酸。其中途徑 ①①（填寫“①”或“②”），得到的改造后的目的基因能與載體A進行重組。
（3）利用上述方法構建目的基因B與載體A的重組載體需要使用的酶是 Cre重組酶和DNA連接酶Cre重組酶和DNA連接酶。這與使用同一種限制酶構建基因表達載體相比，前者具有的優(yōu)點是 目的基因與載體之間不可能發(fā)生反向連接目的基因與載體之間不可能發(fā)生反向連接。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】2；；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧孩苷酸；①；Cre重組酶和DNA連接酶；目的基因與載體之間不可能發(fā)生反向連接
；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧孩苷酸；①；Cre重組酶和DNA連接酶；目的基因與載體之間不可能發(fā)生反向連接【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/15 8:0:9組卷：3難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6