TGFβ信號通路可通過S蛋白去磷酸化抑制癌細胞增殖，與該過程有關的N蛋白磷酸化后被激活，可使S蛋白發(fā)生磷酸化。藥物SPD可通過影響R蛋白來增強細胞對TGF-β信號通路的響應。為探索藥物SPD治療癌癥的機理，科研人員通過構建基因表達載體來獲得融合蛋白S-HA、N-HA和R-HA。HA是一種短肽，連接在S、N或R蛋白的羧基端（不影響S、N或R的功能），細胞中只有帶HA標簽的融合蛋白能與介質上的HA抗體結合，從而分離得到HA標簽融合蛋白。構建融合蛋白S-HA基因表達載體的模式圖如圖1（注：雙鏈DNA的一條鏈是編碼鏈，另一條鏈是轉錄的模板鏈）。請回答下列問題：
（1）啟動子是 RNA聚合RNA聚合酶識別和結合的位點；組成HA的基本單位是 氨基酸氨基酸。
（2）利用PCR技術擴增S基因并保證其兩端存在限制酶NheⅠ和HindⅢ的識別序列時，需添加的一對引物是 ①③①③（選填下面的數字序號）。在反應體系中添加的dNTP的作用是提供 原料原料和 能量能量。
①5'GCTAGCATGGAC3'
②5'CAGGTACGATCG3'
③5'AAGCTTCCATGGCC3'
④5'AAGCTTTCAGTCTA3'
（3）將擴增后的S基因插入載體上，構建圖1所示的S-HA融合基因表達載體。將重組載體導入大腸桿菌前，先用Ca2+處理大腸桿菌的目的是使其成為 感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞。篩選出符合要求的受體菌后，經適宜條件培養(yǎng)，表達出的蛋白質有S蛋白的氨基酸序列但沒有HA的氨基酸序列，據圖1分析，出現該問題的原因是S基因編碼 終止密碼子終止密碼子未刪除，導致融合基因翻譯提前終止，未表達出HA的氨基酸序列。
（4）融合蛋白表達成功并分離得到R-HA和磷酸化的S-HA、N-HA。將三種融合蛋白按照如表所示的組合方式分別在緩沖液中進行反應，檢測S-HA和N-HA的磷酸化水平。據檢測結果推測R蛋白的作用是對S蛋白和N蛋白 去磷酸化有促進作用去磷酸化有促進作用。
| 分組 | ① | ② | ③ | ④ | |
| 組合方式 | R-HA | - | + | - | + |
| P-S-HA | + | + | - | - | |
| P-N-HA | - | - | + | + | |
| 檢測結果 | P-S-HA |
|
|
||
| P-N-HA |
|
|
（5）向細胞培養(yǎng)液中加入不同濃度SPD，處理相同時間，通過電泳檢測細胞中R蛋白水平，結果如圖2所示。綜合以上研究結果推測，藥物SPD治療癌癥的機理可能是：SPD通過促進
R蛋白表達或者促進R蛋白表達對S蛋白去磷酸化
R蛋白表達或者促進R蛋白表達對S蛋白去磷酸化
，直接或間接降低 S蛋白的磷酸化水平
S蛋白的磷酸化水平
水平，從而抑制癌細胞的增殖。
【答案】RNA聚合；氨基酸；①③；原料；能量；感受態(tài)細胞；終止密碼子；去磷酸化有促進作用；R蛋白表達或者促進R蛋白表達對S蛋白去磷酸化；S蛋白的磷酸化水平
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/5/29 8:0:9組卷：13引用：2難度：0.5
相似題
-
1．科研人員利用大腸桿菌構建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現以p-B質粒為載體，構建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產物能抑制大腸桿菌 DNA 復制。圖中箭頭表示相關限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應的局部序列（前10個堿基序列），并標明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數量為個。
（3）利用圖中的質粒和AH基因構建重組質粒時，宜選用限制酶雙酶切質粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進轉化。
（4）經上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應含有的質粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術又稱為DNA重組技術，回答相關問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因導入植物細胞時，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正?；驅氚屑毎约m正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產生成熟淋巴細胞，科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失的小鼠進行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達載體的和之間．
（2）將干擾素基因導入ES細胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA分子上，再將能正常表達干擾素的細胞轉入到小鼠體內，這種治療方法稱為．導入ES細胞而不是導入上皮細胞是因為ES細胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細菌導致的肺炎，引起這種現象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；驅胗谢蛉毕莸募毎校员磉_出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產生的mRNA分子與病變基因產生的進行互補結合，來阻斷非正常蛋白質的合成；第三類是編碼可以殺死癌細胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
把好題分享給你的好友吧~~