為了提高馬鈴薯對(duì)真菌病害的抗性，某科研小組進(jìn)行了馬鈴薯轉(zhuǎn)基因抗病育種的初步研究，其過程如下所示，請(qǐng)將其完善：
（1）從生防木霉菌株中提取總RNA以及通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程合成cDNA。
（2）利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因Chi（抗菌基因）進(jìn)行擴(kuò)增；PCR產(chǎn)物與PMD^TM18-T載體連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，獲得重組質(zhì)粒PMD^TM18-T-Chi。
（2）植物表達(dá)載體的構(gòu)建（如圖所示）：將重組質(zhì)粒PMD^TM18-T-Chi和p33ECR質(zhì)粒用

BamHI和SacI

BamHI和SacI

（填具體酶）進(jìn)行酶切，再用T₄DNA連接酶連接，得到p33ECR-Chi。此過程中一般會(huì)使用高濃度的T₄DNA連接酶，T₄DNA連接酶的作用是

既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端

既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端

。表達(dá)載體中p35S是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識(shí)別和結(jié)合的部位。

（3）p33ECR-Chi工程菌的獲得：將p33ECR-Chi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌菌株中，在含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養(yǎng)基上獲得白色菌斑，挑菌落，獲得工程菌。
（4）轉(zhuǎn)基因植株的獲得：通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將Chi基因轉(zhuǎn)化到馬鈴薯栽培品種試管馬鈴薯的塊莖中。試管馬鈴薯的塊莖是馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化的理想外植體，分析其具有的優(yōu)點(diǎn)是

取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生

取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生

（寫出兩點(diǎn)）。
（5）對(duì)馬鈴薯進(jìn)行抗菌檢測(cè)：從分子水平上可采用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

法檢測(cè)目的基因表達(dá)的產(chǎn)物；從個(gè)體水平上進(jìn)行檢測(cè)的操作是

霉菌接種實(shí)驗(yàn)

霉菌接種實(shí)驗(yàn)

。