某水稻品種體內(nèi)含有基因Q,該基因在水稻體細胞和精子中正常表達,但在卵細胞中該基因不能與RNA聚合酶結(jié)合而無法表達。為了獲得基因Q能夠表達的卵細胞,研究人員進行了相關(guān)研究?;卮鹣铝袉栴}:
(1)為了獲取基因Q中編碼蛋白質(zhì)的核苷酸序列,可從水稻體細胞或精子體細胞或精子細胞中提取總RNA,然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后構(gòu)建基因文庫基因文庫。
(2)將基因Q中編碼蛋白質(zhì)的序列與Luc基因(熒光素酶基因,熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光)拼接成Q-Luc融合基因(融合基因中的Q和Luc基因都能獨立表達),拼接過程需要的酶是DNA連接酶DNA連接酶。將融合基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNAT-DNA中,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將融合基因轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織。
(3)與誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基相比,將愈傷組織培育成轉(zhuǎn)基因植株時,培養(yǎng)基組成成分的主要區(qū)別是植物激素種類及比例不同植物激素種類及比例不同,培養(yǎng)條件的主要差異是需要光照需要光照。
(4)將轉(zhuǎn)基因水稻培育成熟后,其卵細胞中的基因Q能夠進行正常表達,推測可能的原因是T-DNA的啟動子可與卵細胞中的RNA聚合酶結(jié)合T-DNA的啟動子可與卵細胞中的RNA聚合酶結(jié)合。在分離并培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因水稻卵細胞的過程中,可以篩選出能夠表達基因Q的卵細胞,篩選的方法是向培養(yǎng)基中加入熒光素,篩選出能產(chǎn)生熒光的細胞向培養(yǎng)基中加入熒光素,篩選出能產(chǎn)生熒光的細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】體細胞或精子;基因文庫;DNA連接酶;T-DNA;農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化;植物激素種類及比例不同;需要光照;T-DNA的啟動子可與卵細胞中的RNA聚合酶結(jié)合;向培養(yǎng)基中加入熒光素,篩選出能產(chǎn)生熒光的細胞
【解答】
【點評】
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