研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌,將其添加于飼料中,以提高家禽養(yǎng)殖效率??莶菅挎邨U菌能分泌一種可降解纖維素的酶,這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因,需使用圖1中質(zhì)粒為載體,圖2為含W基因的DNA片段。

(1)采用 PCRPCR技術(shù)可以快速、大量獲得W基因。利用該技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí),要有 目的基因兩端的已知核苷酸序列目的基因兩端的已知核苷酸序列,以便合成引物,該技術(shù)需要 dATP、dGTP、dCTP、dTTP(或dNTP)dATP、dGTP、dCTP、dTTP(或dNTP)等作為原料和直接能源物質(zhì)。
(2)啟動(dòng)子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。很多啟動(dòng)子具有物種特異性,在圖1質(zhì)粒中插入W基因,其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇 BB(填寫(xiě)字母)。
A.枯草芽孢桿菌啟動(dòng)子
B.乳酸桿菌啟動(dòng)子
C.農(nóng)桿菌啟動(dòng)子
(3)根據(jù)圖1和圖2,應(yīng)使用限制酶 EcoRⅠ、HindⅢEcoRⅠ、HindⅢ切割圖2中含W基因的DNA片段,導(dǎo)入質(zhì)粒以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒。所得重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后,使用含 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選,以得到轉(zhuǎn)入W基因的乳酸桿菌。
(4)為確定導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌是否具有分解纖維素的能力,研究人員用液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)下表所示菌種。取部分菌液上清液測(cè)定酶活力,實(shí)驗(yàn)方案及測(cè)定結(jié)果如表所示。表中的X應(yīng)為 導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸桿菌導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸桿菌。
菌種 | 酶活性相對(duì)值 |
乳酸桿菌 | 未檢出 |
X | 未檢出 |
導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌 | 0.96 |
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】PCR;目的基因兩端的已知核苷酸序列;dATP、dGTP、dCTP、dTTP(或dNTP);RNA聚合酶;B;EcoRⅠ、HindⅢ;氨芐青霉素;導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸桿菌
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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