Sanger法DNA測序的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）五碳糖的2'和3'碳原子都不含羥基，在DNA合成過程中不能形成“相應(yīng)化學(xué)鍵”，因此可中斷DNA分子合成反應(yīng)。在四個含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的PCR反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標(biāo)記的ddNTP（分別為ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP），在PCR過程中復(fù)制隨機終止，產(chǎn)生四組不同長度的一系列終止處帶有標(biāo)記的DNA片段，如圖1．然后在變性凝膠上進(jìn)行電泳和放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列，具體過程見圖2．（注：ddA是ddATP的縮寫形式）
（1）題干中“相應(yīng)化學(xué)鍵”是磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵，圖1過程Ⅰ橫線①處加入的物質(zhì)的特點是耐高溫耐高溫，該過程需要添加引物的原因是DNA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸添加到已有核酸片段上DNA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸添加到已有核酸片段上。
（2）題干中“在變性凝膠上進(jìn)行電泳……”中“變性”是指破壞DNA分子中氫鍵，獲得單鏈破壞DNA分子中氫鍵，獲得單鏈，其目的是避免模板鏈對結(jié)果的影響（或使模板鏈與子鏈分離，使電泳結(jié)果直接反映子鏈的長度，便于讀序）避免模板鏈對結(jié)果的影響（或使模板鏈與子鏈分離，使電泳結(jié)果直接反映子鏈的長度，便于讀序）。
（3）某同學(xué)要通過PCR技術(shù)獲得被32P標(biāo)記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段，在反應(yīng)管中已有模板、引物、酶和相應(yīng)緩沖液等，還需加入的原料有dATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTPdATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTP。
（4）若模板鏈?zhǔn)恰?'…TCAGCTCGAATC…5'”，變性后電泳結(jié)果如圖2所示，則模板DNA電泳后所處的位置最可能為b處b處（選填“a處”或“b處”），原因是模板DNA長度最長（分子量最大）模板DNA長度最長（分子量最大）。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】磷酸二酯鍵；耐高溫；DNA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸添加到已有核酸片段上；破壞DNA分子中氫鍵，獲得單鏈；避免模板鏈對結(jié)果的影響（或使模板鏈與子鏈分離，使電泳結(jié)果直接反映子鏈的長度，便于讀序）；dATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTP；b處；模板DNA長度最長（分子量最大）
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：1難度：0.7
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1．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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