氨基酸定點(diǎn)突變分析是研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能、酶催化機(jī)理以及對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行定向改造的重要技術(shù)。在基因內(nèi)部引入點(diǎn)突變，是獲得氨基酸定點(diǎn)突變的主要方式。如圖1是利用PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變技術(shù)的原理圖，其中三個(gè)引物分別為F1（5'-GGAATTCCATATGAGGATCCTCTTTC-3'）（GAATTC為EcoRⅠ識(shí)別位點(diǎn)，并切割G和A之間的磷酸二酯鍵，CATATG為NdeⅠ的識(shí)別序列，并切割C和A之間的磷酸二酯鍵）、F2（5'-TGGGACGACTTCGCCTCGACCATGC-3'）（黑體GA為突變堿基）和R2（5'-CCCCCCGGGGGCGGCCAGCCGCTC-3'）（CCCGGG為SmaⅠ的識(shí)別序列，并切割C和G之間的磷酸二酯鍵），野生型基因已連接在質(zhì)粒PIK340上，且序列已知。
（1）第2輪PCR是在第1輪PCR的反應(yīng)體系中進(jìn)行的，雖然只加入了F1引物，但仍能得到突變基因的原因是 引物1和含有突變位點(diǎn)的片段可以作為一對(duì)引物對(duì)野生型基因進(jìn)行PCR引物1和含有突變位點(diǎn)的片段可以作為一對(duì)引物對(duì)野生型基因進(jìn)行PCR，得到的突變基因與pT7Blue質(zhì)粒連接時(shí)需用的酶是 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）
（2）在IPTG和X-gal存在的條件下，Laz基因表達(dá)后，產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，否則為白色。據(jù)圖分析，在固體培養(yǎng)基上添加IPTG和X-gal后，形成的白色菌落不一定是成功導(dǎo)入克隆載體的大腸桿菌，理由是 大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)沒有Laz基因大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)沒有Laz基因。若要選出成功導(dǎo)入克隆載體的大腸桿菌，還應(yīng)在培養(yǎng)基中加入 氨芐青霉素氨芐青霉素。
（3）為驗(yàn)證白色菌落中是否成功導(dǎo)入克隆載體，用EcoRⅠ和SmaⅠ雙酶切提取的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖2：
①據(jù)圖分析，該突變基因的長(zhǎng)度大約為 1.13kb1.13kb。
②為驗(yàn)證2～8號(hào)樣品中是否發(fā)生了預(yù)期突變，隨機(jī)抽取四組進(jìn)行測(cè)序，并與野生型基因進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如圖3，該結(jié)果說明 2～8號(hào)樣品中發(fā)生了預(yù)期突變2～8號(hào)樣品中發(fā)生了預(yù)期突變。
（4）若該突變基因成功表達(dá)，則可獲得氨基酸定點(diǎn)突變的蛋白質(zhì)，該工程與基因工程的區(qū)別是 可以生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì)可以生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】引物1和含有突變位點(diǎn)的片段可以作為一對(duì)引物對(duì)野生型基因進(jìn)行PCR；T4DNA連接酶；大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)沒有Laz基因；氨芐青霉素；1.13kb；2～8號(hào)樣品中發(fā)生了預(yù)期突變；可以生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/19 8:0:9組卷：8引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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