有研究表明CDKN2B基因與小鼠的壽命有關(guān),科學(xué)家將該基因?qū)胄∈篌w內(nèi),統(tǒng)計其壽命是否高于正常小鼠。圖1表示CDKN2B基因與相關(guān)限制酶酶切位點,該基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA堿基序列與A鏈的堿基序列相同(T、U視為相同的堿基),圖2為質(zhì)粒簡圖,請回答下列有關(guān)問題:
(1)科學(xué)家首先采用PCR技術(shù)對目的基因進行擴增。PCR-過程中有兩次升溫一次降溫,其中降溫的目的是
讓兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合
讓兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合
。
(2)科學(xué)家在構(gòu)建基因表達載體過程時,目的基因應(yīng)插在啟動子
啟動子
和終止子
終止子
之間才能正常表達。單獨使用限制酶HindⅢ分別切割目的基因和載體后產(chǎn)生黏性末端。攜帶CDKN2B基因的重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)約一半的細(xì)胞中沒有檢測到CDKN2B蛋白,原因是部分基因反向連接
部分基因反向連接
。為了避免這種現(xiàn)象的發(fā)生,應(yīng)對以上方法進行改進,改進措施為同時用PstⅠ,EcoRI分別對目的基因和載體進行酶切
同時用PstⅠ,EcoRI分別對目的基因和載體進行酶切
。
(3)若想讓一個轉(zhuǎn)入了自的基因的受精卵發(fā)育成多個個體,可以采用胚胎分割
胚胎分割
技術(shù),操作時應(yīng)注意做到將囊胚的內(nèi)細(xì)胞團均等分割
將囊胚的內(nèi)細(xì)胞團均等分割
。